在获得性免疫系统中,T细胞是主要的功能细胞之一,负责识别抗原,并协调其他的免疫细胞进行免疫应答。再生理情况下,T细胞的识别受到MHC分子的限制,即在识别抗原肽的同时,还需要能识别结合抗原肽的自身MHC分子,二者才能相互作用。为了高效且快速的针对病原发生有效的免疫应答,一方面,不同的T细胞克隆要特异性的识别具有不同氨基酸序列的抗原表位；另一方面,由于病原体的种类千变万化,而体内的T细胞克隆降数却是有限的,故T细胞对抗原的识别要有一定程度的交叉,即T细胞对普通抗原的识别同时具有肽特异性及交义反应性。同种移植排斥反应让人们跳出了早期TCR抗原识别的自身MHC限制性的概念范围,认识到T细胞可以直接识别同种异体MHC分子(同种抗原)。关于T细胞识别同种抗原及普通抗原是否区别一直存在争议。本论文拟从单个pMHC角度,通过对比单一pMHC所诱导的自身MHC限制性T细胞(自身T细胞)及同种反应性T细胞(同种T细胞)的反应性,证实T细胞识别同种抗原与其识别普通抗原的简并性程度类似,同种抗原识别同普通抗原识别一样,也足pMHC特异性的。我们前期工作中获得了由HLA-A*0201的胞外段和人IgG1-Fc段所构成的融合蛋白(简称HLA-A2二聚体)。该二聚体借助其Fc段可以将单一抗原肽/HLA-A2复合物结合到高表达Fc受体的单核细胞表面,将此单核细胞与自身淋巴细胞共培养,可以诱导针对特定抗原肽/HLA-A2表位的T细胞应答。因此利用结合HLA-A2二聚体的自体单核细胞与淋巴细胞其培养,我们建立针对单一pMHC表位的T细胞应答体外模型。结合到单核细胞上的二聚体提供是抗原肽/HLA-A*0201表位,因此选用HLA-A*0201个体淋巴细胞和结合二聚体的自体单核细胞混合培养,建立针对单一pMHC表位的普通抗原识别模型。而选用HLA-A2阴性个体淋巴细胞和结合二聚体的自体单核细胞混合培养,建立针对单一pMHC表位的同种抗原识别模型。本研究中选用了三种抗原肽：其中Tyr为自身肽,1aNS3和1bNS3为氨基酸序列类似的病毒肽。通过特异性四聚体及IFN-γELISPOT对两种模型中诱导的针对同一pMHC复合物的自身T细胞及同种T细胞其特异性及交叉反应性进行分析。通过对比发现对于同一自身肽/MHC复合物,同种及自身T细胞的反应性不同：同种T细胞对该复合物(自身肽/同种MHC复合物)有明显的特异性应答,而自身T细胞对该复合物(自身肽/self-MHC复合物)无应答；而对于同一病毒肽/MHC复合物,同种T细胞及自身T细胞均对其表现出特异性应答,且同种T细胞对1aNS3和1bNS3所表现出的交叉反应性在自身T细胞应答中也存在。我们的实验通过在普通抗原识别及同种抗原识别模型中讨论T细胞看似矛盾的两个特性：特异性及交叉反应性,说明T细胞对同种抗原的识别同时具有特异性及交义反应性,这一点同普通抗原识别类似, T细胞识别同种抗原其特异性程度并不低于普通抗原识别,其交叉反应性程度也不高于普通抗原识别。本研究的创新点和意义：1.本研究利用结合HLA-A2二聚体的单核细胞和自身淋巴细胞共培养建立针对同一pMHC的普通抗原识别及同种抗原识别模型,虽然涉及的肽及HLA分子种类局限,但为在单表位水平研究同种抗原及普通抗原识别机制提供了新的实验策略。2.本研究从单个pMHC角度,分析同种抗原识别及普通抗原识别,证实T细胞对同种pMHC的识别也是特异性的,其所具有的交叉反应性程度与普通抗原识别类似。
