葡萄酚类物质及其生物合成相关结构基因表达

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本文以‘左山一’、‘左山二’、‘双红’、‘双优’、‘双丰’5个山葡萄品种和2个山-欧杂种葡萄品种‘左红一’、‘左优红’果皮和酒为试验材料,应用HPLC-MS/MS技术,对果实发育过程中果皮及酒中花色苷和非花色苷酚种类及含量变化规律进行了研究。同时,以‘双红’山葡萄果实为试材,应用HPLC-MS/MS和实时荧光定量PCR技术对果实发育过程中酚类物质的含量变化及生物合成相关的14个结构基因mRNA转录水平进行了定量分析。研究结果表明,不同品种果皮中花色苷组成不同,在7个品种果实发育过程中果皮中共检测到花色苷15种。其中,双糖苷6种,单糖苷9种,单糖苷中检测出乙酰化葡萄糖苷1种,香豆酰化葡萄糖苷1种。7个品种转色前均未检测到花色苷,随着果实发育,花色苷含量不断增加,到达成熟时含量最高。主成分分析表明,花青素类、二甲花翠素类和甲基花青素类花色苷对果皮中花色苷的组成起决定作用。7个品种酒中共检测到花色苷15种。其中,双糖苷6种,单糖苷9种,在果皮及酒中首次检测到花葵素-3,5-双葡萄糖苷,在酒中未检测出乙酰化和香豆酰化花色苷。主成分分析表明,花青素类、甲基花翠素类和花翠素类花色苷对酒中花色苷组成起决定作用。7个品种果实发育过程中果皮中共检测到18种非花色苷酚。其中,苯甲酸类3种,肉桂酸类4种,黄烷-3-醇类3种,黄酮醇类5种,白藜芦醇类3种。果皮中非花色苷酚的变化为转色前含量呈上升趋势,转色期至100%着色呈下降趋势,而后缓慢上升至成熟。主成分分析表明,肉桂酸类、白藜芦醇类和黄酮醇类对果实发育过程中果皮中非花色苷酚的组成起决定作用。在7个品种酒中,共检测到30种非花色苷酚。其中,苯甲酸类5种,肉桂酸类7种,黄烷-3-醇类5种,黄酮醇类9种,白藜芦醇类4种。主成分分析表明,肉桂酸类、黄烷-3-醇类和苯甲酸类对酒中非花色苷酚组成起决定作用。‘双红’山葡萄果实的生长曲线表现为双“S”型。转色前未检测到花色苷,转色后花色苷不断积累,至成熟含量最高,花翠素类、甲氧基类、单糖苷类花色苷与总花色苷的变化规律相一致。苯甲酸类花后2-6周未检测到,花后8周至100%着色含量呈上升趋势,而后下降至成熟。肉桂酸类、黄烷-3-醇类在果实整个发育过程中含量呈下降趋势。转色前未检测到白藜芦醇类物质,转色期至成熟含量呈上升趋势。‘双红’果实发育过程中,酚类物质生物合成相关结构基因的表达因果实发育时期而不同。PAL、CHI1、F3H2、DFR、LDOX花后2-4周为上调表达,花后6周至转色期为下调表达,转色期至成熟为上调表达,转色期至成熟花色苷的含量变化与这5个酶基因的转录水平呈正相关;CHS3、RS、UFGT、GST、OMT花后2周至转色期为下调表达,转色期至成熟为上调表达,转色期至成熟花色苷的含量变化与CHS3、UFGT、GST的转录水平呈正相关,白藜芦醇类的含量变化与RS的转录水平呈正相关,甲氧基类花色苷的含量变化与OMT的转录水平呈正相关;F’3’H花后2-4周为上调表达,花后6周为下调表达,花后8周至成熟为上调表达,转色期至成熟花青素类花色苷的含量变化与F3’H的转录水平呈正相关;F3’5’H花后2周至转色期为下调表达,转色后为上调表达,转色期至成熟花翠素类花色苷的含量变化与F3’5’H的转录水平呈正相关ANR花后2周至转色期为上调表达,转色后为下调表达,花后2周至成熟表儿茶素的含量变化与ANR的转录水平呈正相关;LAR2花后2周至转色期为上调表达,转色后为下调表达,花后2周至成熟儿茶素的含量变化与LAR2的转录水平呈正相关。
摘要第3-5页
Abstract第5-6页
1 绪论第13-35页
    1.1 葡萄与葡萄酒中花色苷类物质第13-18页
        1.1.1 葡萄与葡萄酒中花色苷的种类和基本结构第13-15页
        1.1.2 葡萄与葡萄酒中花色苷物理化学性质及与颜色的关系第15-16页
        1.1.3 葡萄与葡萄酒中花色苷的提取分离、鉴定和测定方法第16-17页
        1.1.4 葡萄与葡萄酒中花色苷类物质的生理功能第17页
        1.1.5 葡萄酒颜色的评价方法第17-18页
    1.2 葡萄与葡萄酒中非花色苷酚类物质第18-24页
        1.2.1 葡萄与葡萄酒中非花色苷酚的种类和基本结构第18-23页
        1.2.2 葡萄与葡萄酒中非花色苷酚提取分离、鉴定和测定方法第23页
        1.2.3 葡萄与葡萄酒中非花色苷酚类物质的生理功能第23-24页
    1.3 葡萄中酚类物质的生物合成第24-34页
        1.3.1 葡萄酚类物质生物合成途径第24-28页
        1.3.2 葡萄酚类物质生物合成相关结构基因第28-34页
    1.4 本研究的目的和意义第34-35页
2 7个葡萄品种果实发育过程中果皮中花色苷的变化第35-65页
    2.1 材料和方法第35-37页
        2.1.1 材料第35-36页
        2.1.2 试剂与标样第36页
        2.1.3 仪器和设备第36页
        2.1.4 方法第36-37页
    2.2 结果与分析第37-63页
        2.2.1 果实发育过程中果皮中花色苷的定性分析第37-42页
        2.2.2 果实发育过程中果皮中花色苷种类、含量及色调的变化第42-58页
        2.2.3 成熟期果皮中花色苷的比较分析第58-63页
    2.3 讨论第63-64页
    2.4 本章小结第64-65页
3 7个葡萄品种酒中花色苷的分析第65-77页
    3.1 材料和方法第65页
        3.1.1 材料第65页
        3.1.2 试剂与标样第65页
        3.1.3 仪器和设备第65页
        3.1.4 方法第65页
    3.2 结果与分析第65-75页
        3.2.1 葡萄酒中花色苷的定性分析第65-68页
        3.2.2 葡萄酒中花色苷的定量分析第68-71页
        3.2.3 葡萄酒中花色苷的主成分分析第71-72页
        3.2.4 葡萄酒中花色苷的归类分析第72-74页
        3.2.5 葡萄酒中花色苷的聚类分析第74页
        3.2.6 葡萄酒的色调第74-75页
    3.3 讨论第75-76页
    3.4 本章小结第76-77页
4 7个葡萄品种果实发育过程中果皮中非花色苷酚的变化第77-104页
    4.1 材料和方法第77-78页
        4.1.1 材料第77页
        4.1.2 试剂与标样第77页
        4.1.3 仪器和设备第77页
        4.1.4 方法第77-78页
    4.2 结果与分析第78-102页
        4.2.1 果实发育过程中果皮中非花色苷酚的定性分析第78-84页
        4.2.2 果实发育过程中果皮中非花色苷酚种类及含量的变化第84-100页
        4.2.3 果实发育过程中果皮中非花色苷酚的主成分分析第100-102页
    4.3 讨论第102-103页
    4.4 本章小结第103-104页
5 7个葡萄品种酒中非花色苷酚的分析第104-118页
    5.1 材料和方法第104页
        5.1.1 材料第104页
        5.1.2 试剂与标样第104页
        5.1.3 仪器与设备第104页
        5.1.4 方法第104页
    5.2 结果与分析第104-116页
        5.2.1 葡萄酒中非花色苷酚的定性分析第104-110页
        5.2.2 葡萄酒中非花色苷酚的定量分析第110-113页
        5.2.3 葡萄酒中非花色苷酚的主成分分析第113-115页
        5.2.4 葡萄酒中非花色苷酚的归类分析第115-116页
        5.2.5 葡萄酒中非花色苷酚的聚类分析第116页
    5.3 讨论第116-117页
    5.4 本章小结第117-118页
6 葡萄酚类物质生物合成相关结构基因表达第118-136页
    6.1 材料和方法第118-122页
        6.1.1 材料第118页
        6.1.2 试剂与标样第118-119页
        6.1.3 仪器与设备第119页
        6.1.4 方法第119-122页
    6.2 结果与分析第122-133页
        6.2.1 ‘双红’果实发育过程中果实性状及生理指标的变化第122-124页
        6.2.2 ‘双红’果实发育过程中酚类物质的变化第124-126页
        6.2.3 ‘双红’果实发育过程中酚类物质生物合成相关结构基因的表达第126-133页
    6.3 讨论第133-134页
    6.4 本章小结第134-136页
结论第136-138页
参考文献第138-154页
附录第154-159页
攻读学位期间发表的学术论文第159-160页
致谢第160-161页
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