公鸡弱精症相关候选基因的筛选及功能研究

弱精症论文 DGE论文 RT-qPCR论文 CCNF基因论文 RNAi论文 慢病毒论文
论文详情
中文摘要第3-5页
ABSTRACT第5-6页
缩略词表第10-11页
第一章 文献综述第11-22页
    1 种公畜禽繁殖性能的生产学意义第11页
    2 精子的生命活力—代谢活动第11-16页
        2.1 精原干细胞第11-12页
        2.2 精子的发生(Spermatogenesis)第12页
        2.3 精母细胞发生(Spermatocytogenesis)第12-13页
        2.4 精子发生第13-14页
        2.5 睾丸支持细胞的作用第14-15页
        2.6 影响精子发生的因素第15-16页
    3 精液品质第16页
    4 弱精症第16-17页
        4.1 弱精症概述第16-17页
        4.2 弱精症相关基因的研究进展第17页
    5 RNA干扰技术第17-19页
        5.1 RNAi作用机制第18页
        5.2 siRNA的制备及转染方法第18页
        5.3 RNAi的技术应用第18页
        5.4 慢病毒载体第18-19页
    6 DGE(Digital Gene Expression Profile)数字基因表达谱第19-21页
        6.1 DGE简介第19页
        6.2 数字基因表达谱技术与基因芯片技术的比较第19-20页
        6.3 数字基因表达谱在研究中的应用第20-21页
    7 本研究的目的和意义第21-22页
第二章 公鸡弱精症相关候选基因的mRNA表达分析第22-36页
    1 引言第22页
    2 实验材料第22-23页
        2.1 实验动物第22-23页
        2.2 主要仪器第23页
        2.3 主要试剂第23页
    3 实验方法第23-28页
        3.1 生物信息学分析数字基因表达谱(DGE)第23-24页
        3.2 精液品质检测第24页
        3.3 睾丸组织切片第24页
        3.4 睾丸总RNA提取(Trizol法提取总RNA)第24-25页
        3.5 cDNA的合成及PCR反应第25-26页
        3.6 引物设计与合成第26-27页
        3.7 qPCR检测相关基因的表达第27页
        3.8 荧光定量数据处理与统计分析第27-28页
    4 试验结果第28-33页
        4.1 精液品质和鸡胚孵化率检测(弱精与正常个体的筛选)结果第28页
        4.2 数字基因表达谱DGE的分析筛选结果第28-31页
        4.3 睾丸组织切片观察与统计第31-32页
        4.4 总RNA完整性检测及目的基因的扩增第32-33页
        4.5 候选基因表达结果第33页
    5 讨论第33-36页
第三章 弱精相关候选基因CCNF及功能验证第36-53页
    1 引言第36-37页
    2 实验材料第37-38页
        2.1 实验动物第37页
        2.2 实验仪器第37页
        2.3 实验试剂第37-38页
    3 实验方法第38-41页
        3.1 siRNAs的设计与合成第38页
        3.2 鸡SSCs的分离与鉴定第38-39页
        3.3 鸡睾丸支持细胞分离与鉴定第39页
        3.4 鸡DF1的培养第39页
        3.5 检测目的基因在SSCs、支持细胞和DF1中的表达量第39页
        3.6 siRNAs的转染第39-40页
        3.7 CCNF-siRNA特异序列的干扰效率的定量检测第40页
        3.8 靶向CCNF-siRNA特异序列转染及定量检测第40页
        3.9 CCK-8细胞增殖分析第40-41页
    4 实验结果第41-50页
        4.1 SSCs的分离和鉴定第41-43页
        4.2 支持细胞分离与鉴定第43页
        4.3 DF1细胞形态观察第43-44页
        4.4 检测目的基因在SSCs、支持细胞和DF1中的表达量第44页
        4.5 lentivirus-siRNA转染效率的检测第44-45页
        4.6 四条siRNA的干扰效率检测第45-46页
        4.7 siRNA靶向抑制CCNF的表达第46-48页
        4.8 CCK8检测细胞周期第48-50页
    5 讨论第50-53页
全文结论第53-54页
参考文献第54-61页
致谢第61-62页
发表学术论文目录第62-63页
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