猪环磷酸鸟苷—腺苷酸合成酶cGAS基因的克隆及其功能鉴定
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致谢 | 第4-7页 |
摘要 | 第7-8页 |
1 文献综述 | 第8-16页 |
1.1 天然免疫概述 | 第8页 |
1.2 天然免疫系统识别病原分子 | 第8-12页 |
1.2.1 Toll样受体家族 | 第9-10页 |
1.2.2 RNA识别受体家族 | 第10页 |
1.2.3 NLRs样受体家族 | 第10-11页 |
1.2.4 DNA识别受体 | 第11页 |
1.2.5 其他的PRRs | 第11-12页 |
1.3 cGAS的发现及临床意义 | 第12-13页 |
1.3.1 cGAS的来源及结构 | 第12-13页 |
1.4 cGAS通过STING应对细胞质内外危险信号 | 第13-14页 |
1.5 IRF3在cGAS抗病毒过程中的作用 | 第14-15页 |
1.6 展望 | 第15-16页 |
2 引言 | 第16-17页 |
3 材料与方法 | 第17-38页 |
3.1 材料 | 第17-18页 |
3.1.1 组织样品采集 | 第17页 |
3.1.2 细胞,细胞培养,细胞刺激物 | 第17页 |
3.1.3 菌株和质粒 | 第17页 |
3.1.4 主要仪器设备 | 第17页 |
3.1.5 主要试剂 | 第17-18页 |
3.2 试验方法 | 第18-29页 |
3.2.1 猪cGAS基因序列和系统进化分析 | 第18页 |
3.2.2 猪cGAS基因的克隆和组织分布 | 第18-20页 |
3.2.3 p EGFP-N1-p-cGAS,p3×Flag-CMV10p-cGAS真核表达载体的构建和鉴定 | 第20-21页 |
3.2.4 定点突变质粒的构建 | 第21-22页 |
3.2.5 激光扫描共聚焦显微镜观察猪cGAS亚细胞定位 | 第22页 |
3.2.6 实时荧光定量PCR | 第22-24页 |
3.2.7 亚细胞分离 | 第24页 |
3.2.8 蛋白免疫印迹(western blot ) | 第24-26页 |
3.2.9 荧光素酶报告基因系统IFN-β 启动子活性的检测 | 第26-27页 |
3.2.10 RNAi | 第27-29页 |
3.2.11 数据处理 | 第29页 |
3.3 结果与分析 | 第29-38页 |
3.3.1 猪cGAS基因的序列分析 | 第29-30页 |
3.3.2 猪cGAS序列相似性和在不同物种间的系统进化分析 | 第30-31页 |
3.3.3 RT-PCR分析猪cGAS基因的组织特异性 | 第31-32页 |
3.3.4 猪cGAS基因亚细胞定位 | 第32-33页 |
3.3.5 过表达猪cGAS促进IFN-β 的表达 | 第33-34页 |
3.3.6 猪cGAS依赖STING和IRF3促进IFN-β 的表达 | 第34-36页 |
3.3.7 cGAS是识别PRV及DNA类似物poly(d A:d T)诱导IFN-β 表达的固有免疫识别受体 | 第36-38页 |
5 讨论与结论 | 第38-41页 |
5.1 讨论 | 第38-40页 |
5.2 结论 | 第40-41页 |
参考文献 | 第41-47页 |
英文摘要 | 第47页 |
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