猪环磷酸鸟苷—腺苷酸合成酶cGAS基因的克隆及其功能鉴定

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致谢第4-7页
摘要第7-8页
1 文献综述第8-16页
    1.1 天然免疫概述第8页
    1.2 天然免疫系统识别病原分子第8-12页
        1.2.1 Toll样受体家族第9-10页
        1.2.2 RNA识别受体家族第10页
        1.2.3 NLRs样受体家族第10-11页
        1.2.4 DNA识别受体第11页
        1.2.5 其他的PRRs第11-12页
    1.3 cGAS的发现及临床意义第12-13页
        1.3.1 cGAS的来源及结构第12-13页
    1.4 cGAS通过STING应对细胞质内外危险信号第13-14页
    1.5 IRF3在cGAS抗病毒过程中的作用第14-15页
    1.6 展望第15-16页
2 引言第16-17页
3 材料与方法第17-38页
    3.1 材料第17-18页
        3.1.1 组织样品采集第17页
        3.1.2 细胞,细胞培养,细胞刺激物第17页
        3.1.3 菌株和质粒第17页
        3.1.4 主要仪器设备第17页
        3.1.5 主要试剂第17-18页
    3.2 试验方法第18-29页
        3.2.1 猪cGAS基因序列和系统进化分析第18页
        3.2.2 猪cGAS基因的克隆和组织分布第18-20页
        3.2.3 p EGFP-N1-p-cGAS,p3×Flag-CMV10p-cGAS真核表达载体的构建和鉴定第20-21页
        3.2.4 定点突变质粒的构建第21-22页
        3.2.5 激光扫描共聚焦显微镜观察猪cGAS亚细胞定位第22页
        3.2.6 实时荧光定量PCR第22-24页
        3.2.7 亚细胞分离第24页
        3.2.8 蛋白免疫印迹(western blot )第24-26页
        3.2.9 荧光素酶报告基因系统IFN-β 启动子活性的检测第26-27页
        3.2.10 RNAi第27-29页
        3.2.11 数据处理第29页
    3.3 结果与分析第29-38页
        3.3.1 猪cGAS基因的序列分析第29-30页
        3.3.2 猪cGAS序列相似性和在不同物种间的系统进化分析第30-31页
        3.3.3 RT-PCR分析猪cGAS基因的组织特异性第31-32页
        3.3.4 猪cGAS基因亚细胞定位第32-33页
        3.3.5 过表达猪cGAS促进IFN-β 的表达第33-34页
        3.3.6 猪cGAS依赖STING和IRF3促进IFN-β 的表达第34-36页
        3.3.7 cGAS是识别PRV及DNA类似物poly(d A:d T)诱导IFN-β 表达的固有免疫识别受体第36-38页
5 讨论与结论第38-41页
    5.1 讨论第38-40页
    5.2 结论第40-41页
参考文献第41-47页
英文摘要第47页
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