不同风化程度云母矿物样品表生细菌多样性研究及其溶解矿物机理初探

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微生物是地球上最早的生命,它广泛的分布于各种地质环境中,几乎参与了所有的地质化学过程,直接或间接地影响了地球化学环境,而其与矿物的相互作用是地球上广泛发生的一种地质作用。本论文通过对不同风化程度矿物样品表生细菌种群多样性的研究,为阐明从矿物到土壤过程中微生物群落变化及其与矿物风化之间的关系提供理论依据;通过研究细菌对黑云母矿物的分解效应,有助于加深对矿物风化作用的认识,丰富矿物分解细菌的物种和基因库,为生物肥料的进一步发展提供理论依据和菌种资源。本论文研究的样品采集自安徽省宿松县凉亭镇烽火山云母片岩山区,分别采集了两种风化程度不同的矿物样品及土壤样品。对样品进行了XRD分析和理化性质的测定,结果表明三种样品之间在风化程度上有着明显的差别,其理化性质也存在着明显的风化进程差别。对样品表生细菌群落结构进行了DGGE分析,结果表明三种样品的群落组成有明显差异,而随着样品风化程度的升高,各组样品中细菌群落多样性呈递增趋势,低风化矿物样品多样性最低,而高风化矿物样品和土壤样品较高。从样品中分离到了129株可培养细菌,对其进行矿物分解能力的测定,结果表明,从风化程度较高的矿物及土壤样品中分离得到的细菌中,具有分解矿物能力的细菌比例明显高于低风化矿物样品。利用基于细菌16S rDNA序列的系统发育方法研究不同风化程度样品中细菌的遗传和物种多样性。结果显示不同风化程度样品中矿物分解细菌群落结构均具有明显的多样性,其多样性指数为低风化样品<高风化样品<土壤样品,风化程度对多样性的影响显著。筛选到的矿物分解细菌分布于Actinobacteria, Firmicutes, Alphaproteobacteria, Betaproteobacteria, Gammaproteobacteria五个菌群,Arthrobacte, Rhodococcus, Leifsonia, Bacillus, Paenibacillus, Ochrobactrum, Burkholderia, Ralstonia, Acinetobacter, Pantoea, Rhizobium, Mycobacterium, Staphylococcus13个菌属的40个不同的种,具有显著的物种多样性,其中Betaproteobacteria菌门的Burkholderia菌属为云母矿物分解细菌的优势种群。此外,Ochrobactrum(苍白杆菌属)和Microbaterium(微杆菌属)的矿物分解细菌为本文首次报道。选取三株细菌A41、B35、C1作为供试菌株进行了摇瓶条件溶解黑云母矿物的试验。试验结果表明,三株菌对矿物的分解能力与其产有机酸的能力呈正比关系,菌株B35产有机酸能力最强,其次是C1,而A41最弱,而通过对发酵液中元素溶出情况的测定发现,溶解矿物能力是菌株B35>C1>A41,说明菌株在代谢过程中产生的有机酸可以促进细菌对矿物的风化。
目录第4-7页
摘要第7-9页
ABSTRACT第9-10页
第一章 文献综述第11-27页
    第一节 微生物与矿物相互作用的研究进展第11-17页
        1 微生物对矿物的风化机理介绍第12-15页
        2 微生物的成矿作用第15-17页
    第二节 微生物多样性研究进展第17-26页
        1 微生物多样性的主要内容第17-19页
        2 微生物多样性的研究方法第19-24页
        3 钾矿物分解细菌资源及其多样性研究进展第24-26页
    第三节 立题依据和研究意义第26-27页
第二章 矿物样品的采集及矿物表生细菌群落结构多样性的研究第27-45页
    1 材料第27-28页
        1.1 样品来源第27页
        1.2 培养基第27页
        1.3 试剂第27-28页
    2 方法第28-33页
        2.1 样品扫描电镜观察第28页
        2.2 样品脲酶活性测定第28-29页
        2.3 土壤中转化酶(蔗糖酶)活性的测定第29页
        2.4 样品有机质含量测定(稀释热法)第29-30页
        2.5 样品X-衍射分析第30页
        2.6 样品pH值测定第30页
        2.7 样品有效态元素含量测定第30页
        2.8 矿物及土壤样品中细菌基因组DNA的提取第30页
        2.9 矿物及土壤样品细菌V6-V8区的PCR扩增第30-31页
        2.10 PCR产物的变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析第31-33页
    3 结果和分析第33-43页
        3.1 样品的采集第33-37页
            3.1.1 样品的扫描电镜分析第34-35页
            3.1.2 样品的X-衍射分析第35页
            3.1.3 样品pH值和有机质含量的测定第35-36页
            3.1.4 样品脲酶活性与蔗糖酶活性的测定第36-37页
            3.1.5 样品有效态元素的测定第37页
        3.2 样品表生细菌群落结构多样性分析第37-43页
    4. 讨论第43-44页
    5 小结第44-45页
第三章 可培养矿物分解细菌的分离筛选及其多样性的研究第45-77页
    1 材料第45页
        1.1 样品来源第45页
        1.2 培养基第45页
        1.3 试剂第45页
    2 方法第45-48页
        2.1 表生可培养细菌的分离纯化第45-46页
        2.2 钾矿物分解细菌的筛选第46页
        2.3 铁载体的测定第46页
        2.4 菌株遗传多样性第46-48页
    3 结果第48-73页
        3.1 矿物及土壤样品可培养矿物分解细菌的分离筛选第49-60页
            3.1.1 矿物及土壤样品可培养细菌的分离纯化第49页
            3.1.2 矿物分解细菌的筛选第49-60页
        3.2 培养细菌铁载体的测定第60-62页
        3.3 矿物分解细菌遗传多样性第62-73页
            3.3.1 供试菌株16 rDNA限制性酶切多态性分析第62-67页
            3.3.2 16S rDNA序列测定及系统发育分析第67-73页
            3.3.3 不同风化程度矿物表生可培养细菌的遗传多样性指数分析第73页
    4 讨论第73-75页
    5. 小结第75-77页
第四章 矿物分解细菌溶解矿物机理初探第77-95页
    1 材料第77页
        1.1 菌株来源第77页
        1.2 培养基第77页
        1.3 试剂第77页
    2 方法第77-79页
        2.1 供试菌株的形态学特征第77-78页
        2.2 供试菌株的环境适应性第78页
        2.3 供试菌株对黑云母的摇瓶溶解试验第78页
        2.4 测定方法第78-79页
    3 结果与分析第79-94页
        3.1 供试菌株的选取与鉴定第79-81页
            3.1.1 供试菌株的菌落形态第79-81页
        3.2 供试菌株的环境适应性第81页
        3.3 供试菌株的动态摇瓶实验第81-85页
            3.3.1 OD值的动态变化第81-82页
            3.3.2 发酵液中元素的动态变化第82-84页
            3.3.3 pH值的动态变化第84页
            3.3.4 总酸度的动态变化第84-85页
        3.4 发酵液中有机酸含量分析第85-86页
        3.5 菌株对黑云母矿物的成矿效应第86-94页
            3.5.1 供试菌株在矿物表面的分布第86-87页
            3.5.2 菌株与矿物作用的能谱分析第87-94页
    4. 讨论第94页
    5. 小结第94-95页
全文总结第95-97页
研究展望第97-99页
本文创新之处第99-101页
参考文献第101-107页
致谢第107页
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