银杏叶多糖的制备及其抗氧化性研究

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银杏叶多糖(GBLP,Ginkgo biloba leave polysaccharide)是银杏叶众多生物活性成分之一。有研究表明,银杏叶多糖有抗病毒、抗辐射、抗肿瘤、延缓衰老等生理功能。本文以银杏黄叶为原料,对银杏叶水溶性多糖的制备条件、分离纯化和理化性质进行了系统研究,结果如下:通过单因素试验和正交试验来确定银杏叶粗多糖的最佳制备条件,料液比1:40,提取温度100℃,提取时间4 h,pH为5,参照苯酚-硫酸法标准曲线进行计算,得到银杏叶粗多糖的提取率为12.83%。采用Sevag法去蛋白,用阴离子交换色谱柱DEAE-52对GBLP进行纯化,在0.2 mol/L和0.3 mol/L的NaCl溶液洗脱时得到两种酸性多糖,取峰型对称性好的一组经凝胶色谱Sephadex G-100进一步纯化。通过傅立叶红外扫描(FTIR)测定GBLP的结构,通过基质辅助激光解析飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)分析出分子量。从红外光谱图可以看出,在GBLP的图谱中有若干特征吸收峰。MALDI-TOF-MS分析表明GBLP的分子量为13.5 kDa。以Vc做为阳性对照,研究GBLP的体外抗氧化活性。分别测定了GBLP对DPPH·自由基、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)的清除率。结果表明,其IC50依次为0.36 mg/mL、1.77 mg/mL、4.91mg/mL。本实验制备得到银杏叶多糖具有较好的抗氧化性,是一种新型的天然植物抗氧化物质。银杏叶多糖与大豆肽经过美拉德反应制备了大豆肽的糖基化复合物,该复合物具有更强的抗氧化能力。
摘要第4-5页
Abstract第5页
第一章 绪论第10-20页
    1.1 银杏概况第10-11页
        1.1.1 我国银杏资源第10页
        1.1.2 银杏中的主要成分第10-11页
    1.2 多糖生物功效第11-12页
        1.2.1 抗肿瘤第11页
        1.2.2 免疫功能第11页
        1.2.3 临床应用第11-12页
        1.2.4 抗氧化及抗衰老作用第12页
    1.3 多糖的制备第12-15页
        1.3.1 多糖的提取方法第12-14页
        1.3.2 多糖的分离纯化第14-15页
    1.4 多糖结构的分析第15-17页
        1.4.1 红外光谱第15-16页
        1.4.2 色谱质谱第16页
        1.4.3 电子轰击质谱第16页
        1.4.4 飞行时间质谱仪第16-17页
    1.5 银杏叶多糖的研究进展第17页
        1.5.1 银杏叶多糖的提取第17页
        1.5.2 银杏叶多糖的生物活性第17页
    1.6 蛋白-多糖接枝反应第17-18页
        1.6.1 蛋白质改性方法第18页
        1.6.2 银杏多糖-大豆肽复合物意义第18页
    1.7 本课题研究的主要意义及内容第18-20页
第二章 材料与方法第20-31页
    2.1 实验材料第20页
    2.2 主要试剂与药品第20-21页
    2.3 主要仪器第21页
    2.4 实验方法第21-31页
        2.4.1 银杏叶多糖的制备第21-22页
        2.4.2 粗多糖的定性分析第22-23页
        2.4.3 粗多糖的定量分析第23-24页
            2.4.3.1 糖含量测定第23页
            2.4.3.2 蛋白质含量测定第23-24页
            2.4.3.3 己糖醛酸含量测定第24页
            2.4.3.4 硫酸根含量测定第24页
        2.4.4 影响银杏叶多糖制备的因素第24-25页
        2.4.5 多糖的分离纯化第25-27页
        2.4.6 GBLP的红外光谱测定第27页
        2.4.7 银杏叶多糖TOF实验第27页
        2.4.8 银杏叶多糖抗氧化性的研究第27-29页
            2.4.8.1 多糖对DPPH·自由基的清除作用第27-28页
            2.4.8.2 多糖对·OH自由基的清除作用第28页
            2.4.8.3 多糖对O_2~-·自由基的清除作用第28-29页
        2.4.9 糖肽合成第29-30页
            2.4.9.1 糖-肽复合物的制备第29页
            2.4.9.2 接枝度的测定第29-30页
        2.4.10 数据处理第30-31页
第三章 结果与讨论第31-45页
    3.1 粗多糖定性分析第31页
    3.2 粗多糖定量分析第31-32页
    3.3 银杏叶多糖制备过程中的影响因素第32-36页
        3.3.1 制备过程中料液比产生的影响第32页
        3.3.2 制备过程中提取温度产生的影响第32-33页
        3.3.3 制备过程中提取时间产生的影响第33页
        3.3.4 制备过程中提取pH产生的影响第33-35页
        3.3.5 正交试验第35-36页
    3.4 多糖的纯化第36-38页
        3.4.1 GBLP的DEAE-52纤维素柱层析第36-37页
        3.4.2 GBLP的Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析第37-38页
    3.5 红外光谱分析第38页
    3.6 MALDI-TOF-MS分析第38-39页
    3.7 GBLP抗氧化性的研究第39-42页
        3.7.1 GBLP清除DPPH·的能力第39-40页
        3.7.2 GBLP清除·OH的能力第40页
        3.7.3 GBLP清除O_2~-·的能力第40-42页
    3.8 糖肽的合成第42-45页
        3.8.1 接枝度第42-43页
        3.8.2 多糖-大豆肽复合物抗氧化能力研究第43-45页
第四章 结论第45-46页
参考文献第46-51页
致谢第51-52页
附录第52-53页
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