夏枯草注射液对胰腺癌细胞PANC-1凋亡的影响及机制研究

研究目的：通过研究夏枯草注射液(Injection of Prunella Vulgaris，IPV)对人胰腺癌细胞系PANC 1的干预，观察其对胰腺癌细胞凋亡的影响，并探索其促进胰腺癌细胞凋亡的机制。研究方法：1.体外培养胰腺癌细胞PANC 1，以IPV干预PANC 1细胞。实验共分6组，1个空白对照组和5个药物干预组，干预组分别给予30、60、90、120、150mg/ml五个浓度梯度的IPV，干预12h、24h、36h和48h后，分别通过倒置相差显微镜观察各组胰腺癌细胞生长情况。2. MTT比色法观察PANC 1细胞被药物干预后的存活率，绘制不同干预时间IPV对PANC 1细胞的存活率曲线，并计算半数有效抑制浓度(IC50)。3.应用流式细胞仪技术，通过AnnexinV EGFP/PI双染法检测不同浓度组的IPV对胰腺癌细胞干预24h后的细胞凋亡率。4. RT PCR检测细胞Bax与bcl 2的相对表达量的变化。研究结果：1.倒置显微镜镜观察显示：随着IPV干预剂量的增加，胰腺癌细胞增殖明显受抑制，贴壁细胞逐渐减少。2. MTT检测结果显示：随着药物剂量的增加和干预时间的延长，IPV对PANC 1细胞抑制增殖作用逐渐增强，且在一定剂量范围内，明显具有剂量时间依赖性(P<0.05)，具有统计学意义，IC50=47.75mg/ml。3.流式细胞检测结果显示：IPV可以诱导PANC 1细胞凋亡，随着药物剂量的增加，PANC 1细胞的凋亡也随之增加，且诱导凋亡的作用主要表现在早期凋亡。4. RT PCR检测结果显示：在IPV作用24h后，可使PANC 1细胞上调Bax和下调bcl 2基因表达。在一定剂量范围内，随着药物剂量的增加，bcl 2的表达逐渐降低，并呈现浓度依赖性(P<0.05)；而Bax的表达逐渐增加，亦呈现浓度依赖性(P<0.05)；Bax/bcl 2的比值逐渐增加，亦呈现浓度依赖性(P<0.05)。研究结论：1. IPV能抑制PANC 1胰腺癌细胞的增殖，并在一定剂量范围内呈剂量时间依赖性；2. IPV能诱导PANC 1胰腺癌细胞凋亡；3.其机制：上调了Bax的表达，下调了bcl 2的表达，从而发挥了诱导凋亡、抑制增殖的作用。