石珊瑚的DNA条形码研究及其系统发育分析

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石珊瑚(Scleractinia)属于刺胞动物门(Cnidaria),珊瑚虫纲(Anthozoa),六放珊瑚亚纲(Hexacorallia),石珊瑚目(Scleractinia)。据统计我国的造礁石珊瑚有14科54属174种。珊瑚表型性状的高度相似性使其物种鉴定和分类等存在诸多疑难问题,DNA序列分析可以较好地解决这一问题。目前国内对石珊瑚的系统学研究报道较少,本研究通过比较分析核糖体ITS序列和线粒体COⅢ序列初步探讨海南部分石珊瑚种间、种内遗传距离和分子系统学关系,并对ITS和COⅢ序列是否适宜作为石珊瑚DNA条形码的潜在序列进行了简要评价。研究结果如下:1.石珊瑚的ITS DNA序列中,ITS1的长度为185bp-250bp, GC含量变化范围为40.1%-63.1%;ITS2序列的长度在188bp-238bp之间,GC含量最高,变化范围为43.7%-74.4%;不同种间的5.8S序列长度也不相同,序列长度在153bp-195bp范围变化。这一结果与其他关于石珊瑚ITS区的研究结果相似。在ITS全序列中,变异位点和简约信息位点都远高于保守位点;碱基的颠换(108)高于转换(89),转换与颠换比(R)为0.82。2.ITS序列构建的石珊瑚系统分支树结果表明:(1)菌珊瑚科牡丹珊瑚属中的易变牡丹珊瑚、十字牡丹珊瑚和小牡丹珊瑚均聚在一起;(2)滨珊瑚科滨珊瑚属的澄黄滨珊瑚的大部分个体聚为一支;(3)蜂巢珊瑚科扁脑珊瑚属的交替扁脑珊瑚和中华扁脑珊瑚也聚为一支,这一结果与传统的分类学一致;(4)与传统形态学分类不一致的大多数个体属于蜂巢珊瑚科几个属中,主要为同星珊瑚属、刺叶珊瑚属、刺孔珊瑚属和角蜂巢珊瑚属。3.石珊瑚的COⅢ基因序列中,A、T、C、G核苷酸的平均含量分别为41.1%、21.0%、21.8%和16.1%,A+T含量显著高于C+G含量,且四种碱基在每个个体中的分布比较均匀。COⅢ序列中,保守位点为341,变异位点为176,信息位点为118,自近裔位点为16,单倍型数H=29,单倍型基因多样性指数Hd=0.898,核苷酸多样性指数pi=0.12833,表明石珊瑚含有较高的遗传多样性。三联体密码子中,第三个核苷酸的碱基替换频率较大(0.95)。4.COⅢ基因构建的系统分支树结果显示:(1)种内个体间的系统发育关系与形态学分类结果比较一致,只有蜂巢珊瑚科小星珊瑚属的紫小星珊瑚个体(L.puYlll)与同科的同星珊瑚属的曲同星珊瑚聚在一起;(2)属内种间的系统发育关系与形态学分类结果也比较一致;(3)科内属间的系统发育关系比较混乱,与形态学分类结果有较大差异,蜂巢珊瑚科的扁脑珊瑚属的交替扁脑与同科的小星珊瑚属的紫小星珊瑚聚在一起,此后却与梳状珊瑚科的刺叶珊瑚属的粗糙刺叶聚在一起,并随后再与裸肋珊瑚科刺柄珊瑚属的腐蚀刺柄聚在一起,最后才与蜂巢珊瑚科的同星珊瑚属和小星珊瑚属聚在一起。5.以ITSDNA序列和COⅢ基因序列构建的石珊瑚分子系统树结果显示,ITS DNA序列和COIII DNA序列不适合作高阶元的系统发育标记,但可以有效作为物种种内间的分子标记。
摘要第4-6页
Abstract第6-7页
目录第8-10页
第一章 文献综述第10-21页
    1. DNA条形码概述第10-17页
        1.1 DNA条形码的发展第10-11页
        1.2 DNA条形码原理第11页
        1.3 DNA条形码的筛选开发第11-12页
        1.4 DNA条形码的应用第12-14页
        1.5 我国DNA条形码研究现状第14-15页
        1.6 DNA条形码的挑战第15页
        1.7 DNA条形码的展望第15-17页
    2. 珊瑚的分类与系统学研究第17-20页
        2.1 珊瑚的分类、特征及分布第17-19页
        2.2 石珊瑚的系统发育分析第19-20页
    3. 本实验的研究目的及意义第20-21页
第二章 石珊瑚的rDNA ITS序列分析第21-40页
    1. 前言第21-22页
    2. 实验材料与方法第22-27页
        2.1 样品来源第22-23页
        2.2 主要溶液配制的方法第23页
        2.3 主要仪器设备第23页
        2.4 方法第23-27页
    3. 实验结果第27-38页
        3.1 基因组DNA的提取和阳性克隆检测第27-28页
        3.2 ITS序列碱基组成和变异分析第28-30页
        3.3 种内和种间遗传距离第30-34页
        3.4 系统分支树第34-38页
    4. 讨论第38-40页
        4.1 ITS基因序列碱基分析第38页
        4.2 ITS基因序列系统学分析第38-40页
第三章 石珊瑚的COⅢ DNA序列分析第40-53页
    1. 前言第40页
    2. 实验材料与方法第40-41页
        2.1 样品来源第40-41页
        2.2 -2.4 实验方法第41页
    3. 实验结果第41-51页
        3.1 基因组DNA的提取和阳性克隆检测第41-42页
        3.2 COⅢ序列碱基组成、密码子碱基变异分析第42-46页
        3.3 种间和种内遗传距离第46-48页
        3.4 系统分支树第48-51页
    4. 讨论第51-53页
        4.1 COⅢ基因序列碱基分析第51页
        4.2 COⅢ基因序列系统发育分析第51-52页
        4.3 基于两种基因序列在石珊瑚中的系统发育分析第52-53页
第四章 结论第53-54页
参考文献第54-62页
作者在读期间论文发表情况第62-63页
致谢第63页
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