人肝癌发生的蛋白质组学研究及ANXA4等蛋白质的表达与功能验证

人类肝癌是诊治困难、预后极差的一种恶性肿瘤，其发生发展是多因素参与的多环节的病理过程，传统的单基因研究模式限制了肝癌相关因素的研究发展。近年来迅速发展的蛋白质组学研究，能动态、整体、定量地考察疾病发生发展过程中全部蛋白质种类和数量的变化，对于探讨疾病发病机理、寻找疾病诊断的特异性标志物和药物治疗的靶标来说，是一种有效的高通量的研究模式，可获得一些传统手段无法得到的新蛋白标志物、新关键分子，极大地丰富了诊断标志物的选择组合及复杂致病机理的全面阐明。本研究运用蛋白质组学研究方法及手段，通过对人类正常肝组织、乙型肝炎组织、肝硬化肝组织、肝细胞性肝癌组织的全蛋白质组表达谱差异分析，筛选出了一些有潜在应用价值的差异蛋白质，对其中的差异分子annexins A4(ANXA4)、PeroxiredoxinⅡ(PrxⅡ)、PeroxiredoxinⅢ(PrxⅢ)在肝癌组织中进行表达验证，并采用RNA干扰技术以及癌发生相关生物学特性的鉴定方法对ANXA4进行了功能分析。 第一部分 人肝细胞性肝癌发生相关的蛋白质组学研究 本部分应用双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis，2-DE)结合基质辅助的激光解析离子化-飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption／ionization-time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)等蛋白质组学技术，对正常肝组织、乙型肝炎组织、肝硬化肝组织、肝细胞性肝癌组织的全蛋白质差异表达谱进行分析，筛查在肝癌发生过程中发挥重要作用的差异蛋白分子。 选择正常人肝组织(A组)5例，以及临床病理确定为乙型肝炎的肝组