对虾黄头病液相基因芯片检测技术的研究

黄头病论文 液相芯片论文 荧光编码微球论文
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对虾黄头病是由黄头病毒(Yellow head virus, YHV)引起的一种对虾传染性疾病,濒死对虾头部和胸部因肝胰腺发黄而外观呈黄色,故称黄头病。黄头病毒属于套式病毒目(Nidovirales),杆套病毒科(Ronivi-ridae),头甲病毒属(Okavirus)的成员。我国将其列为二类疫病,世界动物卫生组织(International office of Epizootic Disease,OIE)将其列为必须申报的疫病。1992年初,在泰国南部的Nakornsrithammarant Pakpaneng地区养殖的斑节对虾中首次报道发现了黄头病。2005年5月,上海出入境检验检疫局首次从两批由泰国进境的草虾中检出黄头病毒,该病毒对我国对虾养殖业的威胁越来越严重。本研究内容包括两个部分:(1)获取病料并提取病毒RNA,通过RT-PCR得到理想长度的cDNA,然后设计了一对特异性引物,优化PCR反应中的退火温度、Mg2+浓度、循环数等参数,得到了需要的DNA片段。(2)根据要求选择两种高效的荧光编码微球,用EDC一步法与核酸探针偶联,并检测偶联效率,结果显示相当高的偶联效率。建立对虾黄头病(Yellow headdisease, YHV)液相基因芯片检测体系,成功的检测出黄头病毒的GP116基因,对各个条件的进一步优化,以便将来用于实践操作检测对虾黄头病毒。
摘要第7-8页
Abstract第8页
第一部分 文献综述第9-15页
    1.1 黄头病的研究进展第9页
    1.2 黄头病病原学和分子生物学特点第9-10页
    1.3 流行病学第10-11页
    1.4 临床症状及病理变化第11-12页
    1.5 疾病诊断第12-13页
        1.5.1 初步诊断第12页
        1.5.2 实验室诊断第12-13页
        1.5.3 鉴别诊断第13页
    1.6 疾病的防治第13-14页
        1.6.1 预防第13页
        1.6.2 具体措施第13-14页
        1.6.3 划区管理第14页
    1.7 本试验研究的目的和意义第14-15页
第二部分 实验研究第15-31页
    1 材料和方法第15-23页
        1.1 材料第15-16页
            1.1.1 病毒材料第15页
            1.1.2 仪器设备第15页
            1.1.3 主要试剂第15-16页
            1.1.4 主要配制试剂第16页
        1.2 方法第16-23页
            1.2.1 引物与探针的设计与合成第16-17页
            1.2.2 病毒 RNA 的提取第17页
            1.2.3 反转录 PCR 获得 cDNA第17-18页
            1.2.4 cDNA 进行 PCR 获得目的片段第18-19页
            1.2.5 核酸电泳第19页
            1.2.6 YHV 液相芯片检测方法的建立第19-23页
    2 结果与分析第23-26页
        2.1 病毒 RT-PCR 扩增检测结果第23页
        2.2 黄头病毒液相芯片检测体系的建立及检测结果第23-24页
        2.3 液相芯片检测方法灵敏性试验结果第24页
        2.4 液相芯片检测方法特异性试验结果第24-26页
    3 讨论第26-31页
        3.1 对虾黄头病的研究现状第26页
        3.2 影响 PCR 结果的因素第26-28页
            3.2.1 PCR 引物第26-27页
            3.2.2 温度和循环次数第27页
            3.2.3 DNA 聚合酶第27页
            3.2.4 dNTP 的质量和浓度第27-28页
            3.2.5 模板 DNA第28页
            3.2.6 Mg2+浓度第28页
        3.3 黄头病(Yellow head disease,YHV)基因液相芯片反应体系的建立第28-31页
            3.3.1 液相芯片的发展过程第28页
            3.3.2 液相芯片技术原理第28-29页
            3.3.3 液相芯片技术的优缺点第29-30页
            3.3.4 液相芯片技术的应用和发展前景第30-31页
第三部分 结论第31-32页
    1 结论第31页
    2 创新点第31-32页
参考文献第32-40页
英文缩略表第40-42页
附录第42-44页
论文发表情况第44-45页
致谢第45页
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