[目的]研究多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)患者中DAPK基因启动子区甲基化状态及其mRNA表达情况,探讨它们在MM发生发展中的作用以及它们之间的关系,为全面认识MM的发病机制提供一定的分子生物学依据,并为MM的进一步诊断及靶向治疗提供相应的实验室数据。[方法]收集2009年1月～2011年6月在昆明医学院第二附属医院和第-附属医院就诊的54例MM患者的骨髓标本；包括男性35例,女性19例；年龄从38岁～79岁,中位年龄64岁；初诊患者27例,复诊患者27例；Druie-Salmon分期：Ⅰ期A组2例,Ⅱ期A组16例,Ⅱ期B组4例,Ⅲ期A组19例,Ⅲ期B组13例；分型：IgG型26例,IgA型14例,未分泌型9例、轻链型5例。对照组为40例非血液肿瘤患者的骨髓标本,男性15例,女性25例,年龄从19岁～68岁,中位年龄42岁；缺铁性贫血28例,巨幼细胞性贫血2例,过敏性紫癜1例和特发性血小板减少性紫癜9例。首先,采用甲基化特异性聚合酶链反应研究MM患者骨髓标本中DAPK基因启动子区甲基化情况,同时利用自动测序技术对扩增产物测序分析其碱基甲基化情况；其次,运用实时荧光定量聚合酶链反应检测DAPK基因mRNA表达情况。结果采用SPSS11.5软件包进行统计学分析。[结果]1、MM患者DAPK基因启动子区甲基化状态的研究结果显示：①54例MM患者中,共检出10例DAPK基因启动子区甲基化阳性,甲基化阳性率为18.52%；40例对照组中,没有检出DAPK基因启动子区甲基化,甲基化阳性率为0.00%；MM组与对照组相比,差异存在统计学意义(P<0.05)。②IgG型、IgA型、轻链型和未分泌型MM患者的DAPK基因启动子区甲基化阳性率分别为30.77%、7.14%、20.00%和0.00%；IgG型MM患者与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.0056)；IgA型、轻链型MM患者分别与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.0056)；未分泌型MM患者未检出DAPK基因启动子区甲基化；IgG型、IgA型、轻链型和未分泌型MM患者四组间两两进行比较,差异均无统计学意义(P>0.0056)。③比较男性和女性、年龄≥65岁和<65岁、Ⅰ+Ⅱ期和Ⅲ期、A组和B组、初诊组和复诊组患者的DAPK基因启动子区甲基化阳性率,各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。2、甲基化特异性聚合酶链反应产物利用自动测序技术测序,结果显示,在甲基化扩增产物的DAPK基因启动子区,有10处碱基发生C→T改变,证实甲基化情况的存在。3、MM患者DAPK基因mRNA表达情况：①MM患者低于对照组(1.09±1.35Fold vs1.26±1.38Fold),差异无统计学意义(P>0.05)；②MM患者中甲基化组低于非甲基化组(0.76±1.09Fold vs1.18±1.28Fold),甲基化组、非甲基化组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.0167)；③MM患者的初诊组低于复诊组(0.98±1.19Fold vs1.17±1.72Fold),初诊组、复诊组与对照组三者比较,差异无统计学意义(P>0.0167)。[结论]1、MM患者的DAPK基因启动子区甲基化阳性率明显高于对照组,IgG型MM患者的DAPK基因启动子区甲基化阳性率亦高于对照组,提示DAPK基因启动子区甲基化在MM的发病中具有一定的作用。2. DAPK基因启动子区甲基化阳性率与MM患者的分期、分组及治疗与否无相关性。3、MM患者的DAPK基因mRNA表达量低于对照组,DAPK基因mRNA表达量甲基化组低于非甲基化组及对照组,初诊组和复诊组中DAPK基因启动子区甲基化阳性率相同,而初诊组的DAPK基因mRNA表达量低于复诊组和对照组,但差异均无统计学意义,需扩大样本进一步研究。
