HMGB1单抗对急性坏死性胰腺炎的保护作用及其机制的实验研究

目的：测定急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）患者血清高迁移率族蛋白B1（highmobility group box-1protein, HMGB1）、血清促炎因子白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平变化，初步探讨血清HMGB1、IL-6及TNF-α在AP发生发展中的作用及在评估急性胰腺炎患者严重程度中的价值。方法：按照中华医学会消化病学分会胰腺病学组制定的急性胰腺炎诊治指南，以临床收治的33例重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis, SAP）、38例轻症急性胰腺炎（mild acute pancreatitis, MAP）和51例健康体检者为研究对象，AP患者在入院24h内收集血标本，酶联免疫吸附方法（ELISA）检测血清HMGB1及TNF-α、IL-6变化，分析三者与Ranson评分、APACHEⅡ、Balthazar CT评分的关系。结果：SAP组、MAP组、健康对照组血清HMGB1水平分别为（11.48±4.94）μg/L、（6.13±3.80）μg/L、（1.82±0.64）μg/L，血清HMGB1水平SAP组显著高于MAP组、MAP组显著高于健康对照组（P＜0.05）。SAP组、MAP组、健康对照组血清IL-6水平分别为（553.72±175.76）pg/ml、（265.73±109.95）pg/ml、（16.43±3.32）pg/ml；血清IL-6水平SAP组显著高于MAP组、MAP组显著高于健康对照组（P＜0.01）。SAP组、MAP组、健康对照组TNF-α水平分别为（13.32±5.60）pg/ml、（12.37±5.63）pg/ml、（12.65±4.25）pg/ml，两两比较，均无显著差异（P>0.05）。血清HMGB1水平与AP患者性别、年龄、发病病因无关，HMGB1与IL-6，TNF-α呈显著正相关，相关系数分别为0.896和0.724（P<0.01）。血清HMGB1水平与Ranson评分、BalthazarCT评分呈正相关；血清IL-6水平与Ranson评分、APACHEⅡ评分、Balthazar CT评分均呈正相关；血清TNF-α水平与APACHEⅡ评分呈正相关。血清IL-6水平在并发症组显著高于无并发症组（P＜0.05），而血清TNF-α及HMGB1水平在两组间无显著差异（P>0.05）。结论：血清HMGB1、IL-6、TNF-α水平均与急性胰腺炎病情的严重程度呈显著相关，血清IL-6水平升高与急性胰腺炎并发症的发生显著相关。血清HMGB1水平与IL-6、TNF-α水平呈正相关，三者共同参与了急性胰腺炎时机体的炎症反应。目的：探讨高迁移率族蛋白1（high mobility group box-1protein, HMGB1）在急性坏死性胰腺炎小鼠中的致病机制及其单克隆抗体的保护作用。方法：动物选用雄性ICR小鼠，体重为20～25g，以20％L-精氨酸腹腔注射诱导建立小鼠急性坏死性胰腺炎（acute necrotizing pancreatitis, ANP）模型。随机分为对照组、ANP组及HMGB1单抗组，每组动物36只，所有小鼠在实验前禁食12h，自由饮水，抗体组于造模成功后即刻给予抗HMGB1抗体腹腔内注射，各组按模型制备后12h、24h、48h分成3个亚组，每组12只。采用实时荧光定量PCR法（real time PCR, RT-PCR）检测胰腺及肝脏组织中HMGB1mRNA的表达；应用酶联免疫吸附方法（ELISA）检测血清HMGB1浓度，同时观察ANP组及单抗组胰腺组织学改变。流式细胞仪检测胰腺细胞凋亡坏死率，免疫组化染色法观察胰腺细胞NF-κB的表达。结果：ANP组小鼠胰腺、肝脏组织HMGB1mRNA及其血清蛋白水平在建模后12h开始升高，24h增高更明显，48h仍维持在较高水平；HMGB1单抗组胰腺、肝脏组织中HMGB1mRNA及血清蛋白水平明显低于ANP组（P<0.05），胰腺组织病理改变明显减轻。ANP组小鼠胰腺腺泡细胞坏死率显著增高，凋亡率下降，同时核因子NF-κB的表达增高，抗体处理后胰腺腺泡细胞凋亡率增加，NF-κB表达降低。结论：HMGB1参与ANP的晚期炎症反应，其血清水平与胰腺病变的严重程度相关。HMGB1单抗可明显抑制ANP小鼠胰腺和肝脏HMGB1mRNA的表达、降低血清HMGB1水平，胰腺组织出血、水肿及坏死程度减轻。血清HMGB1在ANP小鼠中的致病机制与诱导胰腺细胞凋亡逃逸及NF-κB表达有关。