抑癌基因ARID1A在肿瘤中的功能及机理的研究

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染色体复合物对细胞多个方面的活动都有着至关重要的作用,这些方面包括转录,DNA复制和DNA损伤修复,染色质重塑过程主要需两类复合物参与,类是ATP依赖染色质重塑复合物,另一类是蛋白质共价修饰复合物,如组蛋白乙酰化和甲基化修饰酶等。ATP依赖染色质重塑复合物由多亚基构成,通过影响局部染色质结构而激活或抑制基因转录,其亚基功能失调可造成染色质重塑异常而引发基因表达调节紊乱进而引起多种疾病如肿瘤等的发生,许多亚基都具有肿瘤抑制作用。ARIDIA是SWI/SNF(染色体重塑复合物的一种)中的一个亚基,最近几年,多篇文章报道ARIDIA在卵巢癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤中频繁发生基因突变,在卵巢癌中,ARIDIA可通过上调p21和SMAD3基因表达而抑制细胞增殖,在脑胶质瘤中,ARIDIA通过影响PI3K/Akt信号通路来抑制细胞增殖。在肝癌中,ARIDIA能抑制肿瘤的转移,但机理并不明确。在胃癌中ARIDIA能够抑制细胞的增殖,但是机理还需要进一步研究,在乳腺癌中对ARIDIA的研究比较少。因此对于ARIDIA在胃癌和乳腺癌中的功能和机理还有待于进一步的深入研究。为了探讨ARIDIA在乳腺癌和胃癌进展中的功能,应用以慢病毒为载体的RNA干扰技术,我们发现干扰ARIDIA的表达促进了乳腺癌和胃癌细胞的生长,迁移及侵袭能力;相反,过表达ARIDIA能够降低乳腺癌和胃癌细胞的生长,迁移及侵袭能力。此外,我们发现在乳腺癌和胃癌中,干扰掉ARIDIA后,Akt的磷酸化水平上升,p21的表达量下降,细胞周期也发生改变,S期增多,G2期减少,过表达ARIDIA后,Akt磷酸化水平下降,p21表达上升,S期减少,G2期增多,同时细胞的凋亡比例上升。在胃癌中还发现干扰ARIDIA表达后,细胞体积变大,葡萄糖消耗量增加。这些结果都表明了ARID1A通过影响Akt的磷酸化水平和细胞周期来调控细胞的增殖。在乳腺癌中,用HMEC细胞系做了基因芯片(对照和ARID1A敲低),结果显示ARID1A敲低后,LIFR, ZEB1等抑制转移的相关基因表达下调,Wnt信号通路抑制因子WIF-1下调,Wnt信号通路相关基因处于异常激活的状态,WB的结果显示,ARID1A敲低后,p-catenin的表达量上升,且主要集中在细胞核中,β-catenin是Wnt信号转导通路中的关键信号分子,进入细胞核后作用在TCF/LEF启动子的TCF DNA结合原件上,在转录水平调控Wnt靶基因的表达。通过检测TOP-Flash的活性发现,ARID1A敲低后,Wnt通路的转录调控活性上升。WB和qPCR的结果显示,Wnt的下游基因,cyclinDl和c-MYC的转录水平和表达量均上升。有文章报道β-catenin/Wnt通路的激活促进乳腺癌的转移,因此以上结果表明,ARID1A可能通过调控p-catenin/Wnt通路来抑制乳腺癌的转移。用乳腺癌细胞系Bcap-37做裸鼠成瘤实验发现,相比于对照,ARID1A敲低后,成瘤更快,且近端转移增加。在胃癌细胞系中,ARID1A敲低后,E-Cadherin的表达量下降,且迁移,侵袭能力增加。单独敲低E-cadherin,胃癌细胞系迁移,侵袭能力增加,过表达E-cadherin,胃癌细胞系迁移,侵袭能力减弱。qPCR的结果显示,ARID1A敲低后,E-cadherin的mRNA水平也降低了,说明ARID1A影响了E-cadherin的转录水平,推测含有ARID1A的SWI/SNF染色体复合物和转录因子结合来调控E-cadherin的表达,因此构建了E-cadherin启动子报告基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示,ARID1A敲低后,E-cadherin的启动子活性降低。以上结果显示,在胃癌细胞系中,ARID1A通过影响E-cadherin的转录从而调控肿瘤的迁移,侵袭。为了进一步验证ARID1A在胃癌样本中的关系,我们用189对癌和癌旁配对的组织做了免疫组化,结果显不,ARID1A在癌旁中的表达水平显著高于癌,而且ARID1A的表达缺失是胃癌不利指标,ARID1A的缺失是胃癌进展,淋巴结转移,浸润的危险因素。E-cadherin与ARID1A的协同表达水平具有显著相关性。结论:在乳腺癌和胃癌中,ARID1A通过调节Akt的磷酸化及细胞周期来调控细胞增殖。在乳腺癌中,ARID1A可能通过调节Wnt/β-catenin通路来抑制肿瘤细胞的迁移,侵袭。在胃癌细胞中,ARID1A通过影响E-cadherin的转录从而调控肿瘤的迁移,侵袭。
中文摘要第5-7页
Abstract第7-9页
前言第10-17页
    1 SWI/SNF染色质重塑复合物与细胞进程及肿瘤的关系第10-12页
    2 ARID1A是SWI/SNF染色质重塑复合物中的一个重要因子第12-13页
    3 ARID1A与肿瘤的关系第13-15页
    4 研究目的及意义第15-17页
第一章 ARID1A在胃癌和乳腺癌中的功能研究第17-54页
    1.1 材料与方法第17-36页
    1.2 实验结果第36-52页
    1.3 讨论与结论第52-54页
第二章 ARID1A在胃癌和乳腺癌中调控生长的机理研究第54-64页
    2.1 材料与方法第54-55页
    2.2 实验结果第55-61页
    2.3 讨论与结论第61-64页
第三章 ARID1A抑制乳腺癌细胞迁移,侵袭的机理研究第64-74页
    3.1 材料与方法第64-66页
    3.2 实验结果第66-72页
    3.3 讨论与结论第72-74页
第四章 ARID1A通过调节E-cadherin的表达来抑制胃癌细胞的迁移和侵袭第74-82页
    4.1 材料与方法第74-75页
    4.2 实验结果第75-80页
    4.3 讨论与结论第80-82页
第五章 胃癌中ARID1A和E-cadherin表达的临床意义第82-89页
    5.1 材料与方法第82-83页
    5.2 实验结果第83-87页
    5.3 讨论与结论第87-89页
参考文献第89-97页
致谢第97-98页
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