吲哚胺2，3-双加氧酶上调人肝癌细胞人类白细胞抗原-G的表达

目的吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）和人类白细胞抗原-G（HLA-G）都是免疫抑制分子，可以诱导机体的免疫耐受状态。二者在表达，调节和功能方面有同样的特性，一些研究证实IDO可以影响抗原提呈细胞和黑色素瘤细胞HLA-G的表达。本实验旨在研究IDO是否对人肝癌细胞SMMC-7721中HLA-G表达有影响，及其可能的调节机制。方法用脂质体lipofectamineTM2000将pcDNA3.1-IDO重组质粒稳定转染入肝癌SMMC-7721细胞（pcDNA3.1-IDO转染组），同时设置空载体对照组（pcDNA3.1转染组）和空白对照组（未转染组），用RT-PCR和Western blot鉴定实验组和对照组细胞IDO mRNA和蛋白的表达，进一步用实时荧光定量PCR和Western blot检测其HLA-G mRNA和蛋白的表达水平；然后分别给予pcDNA3.1-IDO转染组细胞IDO的抑制剂（2.5 mmol/L1-D-MT）和底物（200μmol/L L-色氨酸）干预48 h，观察药物干预对HLA-G mRNA和蛋白表达的影响。结果1、RT-PCR和Western blot显示pcDNA3.1转染组和未转染组未见IDO表达，而pcDNA3.1-IDO转染组细胞高表达IDO。2.实时荧光定量PCR检测各组细胞HLA-G mRNA显示：pcDNA3.1-IDO转染组表达HLA-G mRNA较pcDNA3.1转染组组和未转染组显著上调（分别0.9135±0.0033、0.0037±0.0004、0.0048±0.0005），前者与后两者比较差异有显著统计学意义（P<0.05），后两者比较无明显统计学差异（P>0.05）。pcDNA3.1-IDO转染组细胞分别给予1 -D-MT和L-色氨酸干预后表达HLA-G mRNA（1-D-MT组和L-色氨酸组分别为0.0053±0.0005和0.0046±0.0009）较未干预前（0.9135±0.0033）显著下降，后者与前两者比较有显著统计学差异（P<0.05）。3.Western Blot检测各组细胞HLA-G蛋白结果显示：pcDNA3.1-IDO转染组表达HLA-G蛋白较pcDNA3.1转染组和未转染组显著上调（pcDNA3.1-IDO转染组、pcDNA3.1转染组和未转染组分别为0.9314±0.0252，0.4743±0.0140，0.5019±0.0339），前者与后两者比较差异有显著统计学意义（P<0.05），后两者比较无明显统计学差异（P>0.05）。pcDNA3.1-IDO转染组细胞分别给予1 -D-MT和L-色氨酸干预后表达HLA-G蛋白（1-D-MT组和L-色氨酸组分别为0.6078±0.0025和0.4960±0.0167）较未干预前（0.9314±0.0252）显著下降，后者与前两者比较有显著统计学差异（P<0.05）。结论稳定转染IDO基因的SMMC-7721细胞高表达IDO mRNA及IDO蛋白。IDO可以上调SMMC-7721肝癌细胞HLA-G mRNA和蛋白的表达，1-D-MT可以逆转此过程。色氨酸降解途径参与了IDO对HLA-G的调节。推测IDO可以通过上调肝癌细胞HLA-G的表达诱导肝癌免疫逃逸。