摘要：参附方是临床常用的经典名方,主要由人参、附子两味药组成。参附注射由人参和附子的提取物制成,人参有抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、改善心脑血管系统功能和提高机体免疫力等药理作用；附片有强心、升压、抗休克、抗血栓形成、抗缺氧、抗心肌缺血、抗缓慢性心律失常等药理作用。参附注射液对于心血管疾病等多个方面均有良好效应,经过古今诸多医家的临证实践确证其疗效显著；然而,对于参附注射液内涵的机制研究却寥寥无几[12]。本研究以参附注射液为研究对象,通过体内外实验探讨参附注射液减毒机制,为临床安全、合理用药提供参考。研究方法：本实验在动物水平采用静脉注射乌头碱20μg/kkg诱发大鼠心律失常,观察参附注射液对心律失常的影响；实验分组采用阳性对照胺碘酮组15mglkg、受试药人参组0.5g/kg、附片组0.5g/kg、参附组0.75g/kg。随后从心肌细胞水平研究参附注射液的减毒作用,在实验过程中,人参、附片和参附注射液分别单独处理心肌细胞,观察细胞存活率、LDH释放率、原代心肌细胞搏动频率、Caspase3/7酶活性和细胞凋亡。利用实验室构建的PXR-CYP3A4稳定转染HepG2工程细胞株结合报告基因技术,筛选参附注射液中诱导或抑制PXR-CYP3A4通路的化学成分,并从酶活性水平进行确证。最后从心肌细胞水平研究单体人参皂苷Re及乌头碱对CYP酶在mRNA及蛋白水平的影响,同时检测人参皂苷Re对下游凋亡基因mRNA水平的影响。实验结果：1)乌头碱模型组心率先加快后减慢,参附组和胺碘酮治疗组心率均出现显著性下降,Q-T间期和P-R间期明显延长。参附组,人参组和胺碘酮治疗组均能推迟房性早搏发生时间。2)参附注射液(37,75mg/mL)处理后的H9c2心肌细胞存活率要高于附片注射液。与附片注射液相比,参附注射液(75mg/mL)处理后的H9c2心肌细胞LDH释放率显著降低。参附注射液(150mg/mL)处理4h时显著减轻了附片注射液(100mg/mL)诱导的原代心肌细胞自发搏动频率。与附片注射液(12,25mg/mL)相比,参附注射液(18,37mg/mL)有效降低了Caspase3/7酶活性。细胞凋亡检测也同样表明参附注射液(9,37mg/mL)导致的细胞凋亡要小于附片注射液(6,25mg/mL);可为参附注射液减毒提供依据,但其减毒的深入机制需进一步研究。3)与溶剂对照组比较,人参皂苷Rc、 Rf、Rb2、Rg2、F2、F1、Re50μmol/L处理30、48和60h时,诱导倍数差异均有统计学意义(P<0.05),其中在药物浓度200nmol/L组处理48和60h时,人参皂苷Rb2、Rg2、F1组诱导倍数均显著高于RIF阳性对照组(P<0.05)。酶活性的研究结果表明,在48h时,人参皂苷Rc、Rf、Rb2、F2、F1可以增加CYP3A4酶活性(P<0.05)。4)随着浓度和时间的增加,人参皂苷Re对CYP2C11、CYP2J3mRNA水平均有良好的诱导作用,对CYP4A1mRNA水平均有良好的抑制作用;对CYP4A1蛋白水平也具有良好的抑制作用。人参皂苷Re对于下游凋亡基因Bcl-2有显著诱导作用,而对Bax则有良好的抑制作用。综上,本研究以参附注射液为研究对象,从CYP450酶的角度初步探讨参附注射液减毒的机制：多组分间相互作用在代谢酶系统的减毒作用规律；为其它中药的研究提供新思路。
