花生（Arachis hypogaea）蛋白多肽提取、分离及纯化

本课题将超声技术用于提取花生分离蛋白的试验中，采用响应面法优化提取工艺，采用合理的试验设计，依据回归分析确定各因素对花生分离蛋白提取率的影响，得到了较好的结果，在固定碱液pH为9，超声频率为28KHz的基础上，经优化后确定超声辅助提取花生分离蛋白的最佳工艺条件为：超声功率为210W，超声时间为30min，超声温度为40℃，料液比为1：10.7。花生分离蛋白的最高提取率可达到80.09%。在蛋白酶解制备花生蛋白的过程中采用微波耦合酶法制备多肽，从五中常用的蛋白酶中选出最优酶，木瓜蛋白酶与微波耦合酶解花生分离蛋白得到的短肽得率及蛋白水解度最高，在单因素实验的基础上，固定微波功率为600W，底物浓度为4%，通过响应面对影响酶解花生蛋白的条件进行优化，得到最佳的酶解条件为：微波时间9.5 min, pH值7.1,微波温度50℃,加酶量6500 U/g.在此条件下短肽得率为62%，蛋白水解度为25.89%。采用微波耦合酶解花生分离蛋白制备花生多肽比采用酶法制备花生多肽有较好的短肽得率及蛋白水解度。脱盐过程中，通过对大孔树脂脱盐及纳滤法脱盐结果比较，大孔树脂在选用流速为1.2BV/h,多肽浓度为20mg/ml，洗脱剂为75%的乙醇，测定花生多肽的脱盐率达到85.43%，短肽得率为69.38%的脱盐花生肽。在试验中，操作压力为0.7MPa、料液浓度为5ug/mL、料液pH为8、料液温度为35℃时的脱盐率最高:56.43%,短肽得率为84.37%。大孔树脂的脱盐效果明显比纳滤脱盐效果高，但是短肽的率较纳滤比较少，因此如果需要得到纯度较大含盐量较少的肽选用大孔树脂法脱盐，而对肽纯度要求不高时选用纳滤法脱盐。采用超滤技术对花生短肽进行分离，实验确定的超滤的操作条件为：一级超滤的操作压力为0.4MPa,料液浓度为2%，自然pH值；二级操作的操作压力为0.5MPa,料液浓度为1.5%，自然pH值；三级超滤的操作压力为0.5MPa，料液浓度为1%，自然pH值。并且通过凝胶柱层析Sphadex-G15对超滤后的花生肽进行分子量分布分析。通过对花生多肽及各分子量段的肽进行理化性质的研究，表明，花生多肽与分离蛋白相比，花生多肽具有较好的溶解性，起泡性及乳化性，且5KD以上的分子量肽段具有较好的理化性质更适合最为食品添加剂，抗氧化研究表明，花生肽具有显著的抗氧化能力，其还原力较强，对羟基自由基（OH）、DPPH自由基的清除率十分明显，但其在较高浓度下才表现出较明显的抗亚油酸氧化能力。小于3KD分子量段的多肽抗氧化能力最强，3KD~5KD分子量段的多肽次之，大于5KD分子量的多肽表现出较差的抗氧化能力。花生体外抗ACE活性研究表明，未经超滤的花生多肽的ACE活性抑制IC50在2.13mg/ml而1KD以上的多肽几乎对ACE活性无抑制作用，分子量<1KD的花生多肽的ACE活性抑制IC50为0.41mg/ml。