蛋白质健康标志物准确定量方法研究

蛋白质健康标志物论文 血清总蛋白论文 双缩脲法论文 心肌脂肪酸结合蛋白论文 同位素稀释质谱法论文 大
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摘要第4-7页
ABSTRACT第7-10页
第一章 绪论第19-29页
    1.1 蛋白质健康标志物第19-21页
        1.1.1 蛋白质健康标志物及其应用第19页
        1.1.2 蛋白质定量问题分类第19-20页
        1.1.3 蛋白质定量方法第20-21页
    1.2 血清总蛋白第21-22页
        1.2.1 血清总蛋白的测定意义第21页
        1.2.2 双缩脲法第21-22页
    1.3 脂肪酸结合蛋白(H-FABP)第22-24页
        1.3.1 心血管疾病及心肌损伤标志物第22页
        1.3.2 心肌脂肪酸结合蛋白的意义第22-23页
        1.3.3 心肌脂肪酸结合蛋白定量方法现状第23页
        1.3.4 同位素稀释质谱法第23-24页
    1.4 PCR蛋白定量技术第24-25页
        1.4.1 G2蛋白简介第24页
        1.4.2 PCR定量技术第24-25页
        1.4.3 PCR定量技术应用于蛋白定量第25页
    1.5 课题提出第25-29页
第二章 双缩脲法测定血清中总蛋白浓度第29-43页
    2.1 仪器和试剂第30页
        2.1.1 试剂第30页
        2.1.2 仪器第30页
    2.2 实验部分第30-34页
        2.2.1 双缩脲试剂的配制第30-31页
        2.2.2 移液枪的校准第31页
        2.2.3 紫外-可见光分光光度计的校准第31页
        2.2.4 测定步骤第31-32页
        2.2.5 方法学评价方法第32-33页
        2.2.6 RELA样品的测定第33-34页
    2.3 结果与讨论第34-41页
        2.3.1 移液枪的校准和检定结果第34页
        2.3.2 紫外-可见光分光光度计的校准和检定结果第34-35页
        2.3.3 双缩脲法方法学评价第35-36页
        2.3.4 RELA样品测定结果第36-37页
        2.3.5 不确定度评价第37-40页
        2.3.6 结果反馈第40页
        2.3.7 本研究的亮点第40-41页
    2.4 结论第41-43页
第三章 心肌脂肪酸结合蛋白纯品同位素稀释质谱方法研究第43-57页
    3.1 试剂和仪器第44-45页
        3.1.1 试剂第44-45页
        3.1.2 仪器第45页
    3.2 实验部分第45-48页
        3.2.1 SDS-PAGE纯度测定第45页
        3.2.2 高效液相色谱纯度测定第45-46页
        3.2.3 MALDI-TOF分子量测定第46页
        3.2.4 蛋白质鉴定第46页
        3.2.5 质量平衡法测定H-FABP蛋白质含量第46-47页
        3.2.6 同位素稀释质谱(IDMS)法测定H-FABP蛋白质含量第47-48页
    3.3 结果与讨论第48-56页
        3.3.1 H-FABP基本性质的表征第48-52页
        3.3.2 H-FABP含量HPLC-IDMS测定结果第52-56页
    3.4 结论第56-57页
第四章 血清中心肌脂肪酸结合蛋白含量同位素稀释质谱方法研究第57-67页
    4.1 仪器和试剂第58页
        4.1.1 试剂第58页
        4.1.2 仪器第58页
    4.2 实验部分第58-60页
        4.2.1 蛋白的酶切第58-59页
        4.2.2 酶切肽段MS分析第59页
        4.2.3 天然H-FABP与~(15)N-H-FABP酶切肽段的匹配第59页
        4.2.4 特异性肽段的选择第59页
        4.2.5 血清中H-FABP含量的测定第59-60页
        4.2.6 血清中H-FABP的ELISA试剂盒分析第60页
    4.3 结果与讨论第60-64页
        4.3.1 纯品H-FABP的质量分数的测定第60页
        4.3.2 ~(15)N-H-FABP酶切结果第60-61页
        4.3.3 特异性肽段的选择第61页
        4.3.4 IDMS方法测定血清中的H-FABP第61-62页
        4.3.5 加标回收率第62-63页
        4.3.6 SILAC-IDMS方法的检出限和定量限第63页
        4.3.7 血清中H-FABP ELISA试剂盒分析结果第63-64页
        4.3.8 SILAC-IDMS法的溯源链第64页
    4.4 结论第64-67页
第五章 PCR定量技术应用于G2蛋白定量方法研究第67-85页
    5.1 仪器和试剂第68-69页
        5.1.1 试剂第68页
        5.1.2 仪器第68-69页
    5.2 实验部分第69-73页
        5.2.1 G2蛋白样品的制备及定量第69页
        5.2.2 PCR蛋白定量原理第69-70页
        5.2.3 生物素标记抗体的制备第70-71页
        5.2.4 探针强制靠近实验第71-72页
        5.2.5 荧光定量PCR技术应用于G2蛋白的定量第72-73页
        5.2.6 数字定量PCR技术应用于G2蛋白的定量第73页
    5.3 结果与讨论第73-83页
        5.3.1 强制接近探针检验结果第73-74页
        5.3.2 荧光定量PCR技术应用于G2蛋白定量方法学评价第74-78页
        5.3.3 数字PCR技术应用于G2蛋白定量方法学评价第78-82页
        5.3.4 PCR定量技术与ELISA定量技术的比较第82-83页
    5.4 结论第83-85页
第六章 结论第85-87页
参考文献第87-93页
致谢第93-95页
研究成果及发表的学术论文第95-97页
作者和导师简介第97-98页
附件第98-99页
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