猪血高F低聚肽制备的优化工艺
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为了充分挖掘畜禽血液蛋白质资源及开发具有保健功能的血液深加工生物制品,以猪血浆为原料,通过酶解提取猪血浆蛋白,并利用活性炭对水解液进行吸附脱色,最终获得浅色猪血浆蛋白粉。酶解试验采用Alcasale内切酶,以酶的添加量、酶解温度、酶解时间、pH为试验因子,血浆水解度为响应值,进行四元线性回归正交设计。脱色试验主要考察温度、pH、脱色时间三个因素对脱色效果的影响,并建立了三元二次正交回归模型。结果表明,最佳酶解工艺参数为:酶的添加量6%、酶解温度60℃、酶解时间3.67h、pH值9.5,血浆水解度可达到30.99%;活性炭的用量为2%时,最佳脱色工艺参数为:温度48℃、pH值2.8、脱色时间29min,最终脱色率为76.06%,蛋白质含量为82.24%。以猪血细胞为原料,在超声波破碎细胞后,利用微波辅助技术,对Alcalase内切酶酶解猪血红蛋白的工艺条件进行了优化。结果表明:当水与血细胞体积比为5:1,超声波功率为300W时,超声处理25min后,在功率为500W的微波中进行酶解,得出最佳酶解条件为:Alcalase内切酶加酶量体积比6.77%,酶解温度54℃,酶解时间11min,得到血红蛋白的水解度为23.63%,该文提供了一种快速提取猪血活性肽的试验方法,在实际生产中具有较好的应用价值。酶的固定采用壳聚糖为载体,戊二醛作为交联剂,采用正交试验对固定化的温度、固定化的pH和固定化的时间进行优化分析,由极差分析可知,最后确定最优工艺为,固定酶的温度为40℃,固定时间为9h,固定pH为9。固定化后的酶在144h游离损失2~3%,性质稳定,可以广泛应用。五次连续试验的平均值与对照试验的相对相差分别是:血红蛋白低聚肽的相对相差1.07%,血红低聚肽的相对相差0.17%。以220nm吸光度作为检测指标,用水做流动相,采用凝胶G15,用柱层析对猪血浆蛋白肽和猪血红蛋白肽进行纯化,采用高效液相色谱测定猪血浆高F低聚肽的分子量范围是610.5~1214.1Da,猪血红蛋白高F低聚肽分子量范围是酶解产物大部分为相对分子质量在635.7~1151.1Da的短肽。采用氨基酸自动分析仪测定猪血浆蛋白低聚肽和猪血红蛋白低聚肽氨基酸成分,计算得到F值分别为30.51和38.56。纯化效果猪血浆蛋白低聚肽F值提高了3.59倍,猪血红蛋白蛋白低聚肽F值提高了7.38倍。纯化的效果显著,并且F值符合高F活性肽应该大于等于20的要求。猪血浆高F低聚肽和猪血红蛋白高F低聚肽的安全性评价采用急性毒性,遗传性毒性试验和30天喂养试验研究,为动物血液活性肽保健食品的开发和安全食用提供了科学依据。
中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
第1章 绪论 | 第11-25页 |
1.1 生物活性肽的研究进展 | 第11-14页 |
1.2 高 F 低聚肽的研究进展 | 第14-18页 |
1.3 猪血利用的现状 | 第18-24页 |
1.4 总的实验流程图 | 第24-25页 |
第2章 猪血浆蛋白低聚肽的试验优化 | 第25-41页 |
2.1 材料与设备 | 第25-27页 |
2.2 实验方法 | 第27-29页 |
2.3 结果与分析 | 第29-39页 |
2.4 讨论 | 第39页 |
2.5 小结 | 第39-41页 |
第3章 猪血红蛋白蛋白低聚肽的试验优化 | 第41-55页 |
3.1 材料与设备 | 第41-42页 |
3.2 实验方法 | 第42-44页 |
3.3 结果与分析 | 第44-53页 |
3.4 讨论 | 第53-54页 |
3.5 小结 | 第54-55页 |
第4章 酶的固定化的应用试验优化 | 第55-64页 |
4.1 材料与设备 | 第55-56页 |
4.2 实验方法 | 第56页 |
4.3 结果与分析 | 第56-63页 |
4.4 讨论 | 第63页 |
4.5 小结 | 第63-64页 |
第5章 低聚肽的高 F 化处理的试验 | 第64-75页 |
5.1 材料与设备 | 第64页 |
5.2 实验方法 | 第64-65页 |
5.3 结果与分析 | 第65-73页 |
5.4 讨论 | 第73-74页 |
5.5 小结 | 第74-75页 |
第6章 高 F 低聚肽的安全性的试验 | 第75-77页 |
6.1 材料与设备 | 第75页 |
6.2 实验方法 | 第75-76页 |
6.3 结果与分析 | 第76页 |
6.4 讨论 | 第76页 |
6.5 小结 | 第76-77页 |
全文总结 | 第77-79页 |
参考文献 | 第79-86页 |
导师简介 | 第86-87页 |
作者简介 | 第87-88页 |
硕士期间参与并发表的学术论文 | 第88-89页 |
致谢 | 第89页 |
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