基于DnaE内含肽的定量检测GPCRs内吞方法的建立

G蛋白偶联受体（G-protein-coupled receptors,GPCRs）家族参与了机体内多种生理过程的调节,是治疗多种人类疾病的主要药物靶点。检测非G蛋白亚基依赖的G蛋白偶联受体的内吞可用于研究受体激动剂的活性。本论文首先从蓝细菌克隆到新的DnaE内含肽并鉴定其自我剪接功能;此后我们建立了一种新型的定量分析GPCRs内吞的方法,该方法基于Npu-DnaE内含肽介导的蛋白剪接而重组断裂Renilla荧光素酶活性和被配体活化的受体与β-arrestins2之间的相互作用。试验检测了4个功能差异（即偶联不同亚型G蛋白）的G蛋白偶联受体:昆虫脂动激素受体（AKHR）、人源烟酸受体（HM74a）、人源大麻受体2（CB2）、人源组胺受体1（H1）的内吞作用,结果所得的已知激动剂或拮抗剂引起相应受体内吞的EC50或IC50值与文献一致,充分证明了该方法的可行性与灵敏性。其方便快速、灵敏定量的特性可进一步用于细胞水平上G蛋白偶联受体的功能筛选,为高通量药物筛选领域注入新的力量。