两种虹彩病毒模拟表位的生物信息学筛选与生物淘筛及原核表达载体的构建

虹彩病毒(Iridovirus)是近年来在多种海洋鱼类和两栖类动物中发现的、传染性较强的病毒之一。由虹彩病毒诱发的鱼类疾病引起的鱼类死亡率可达30％~100％，且疾病暴发频率呈逐年增加的趋势，危害极大。对于水产病害的防御，疫苗是一种国际认可的病害防御方法，具有安全、长效、环境友好等特点。其中，DNA疫苗具有其独特的优势，是预防病毒性疾病的首选。在DNA疫苗开发研制中，如何研究和设计出具有更精确有效的免疫原性、反应原性和安全性的疫苗是研究人员所关注和追求的，而诱生机体产生特异性免疫应答的保护性抗原表位基因的分离、鉴定则是DNA疫苗研发的关键。本研究运用反向疫苗学的分析方法，对大菱鲆病毒性红体病虹彩病毒（TRBIV）全基因组序列进行了核酸序列的同源性分析和表达蛋白的功能分析，筛选获得了具有较强免疫原性的MCP216AA和424AA模拟抗原，PCR方法扩增得到含以上两段模拟表的TRBIV MCP654bp候选基因片段。运用经典分子生物学方法将扩增得到的TRBIV MCP654bp基因片段插入到原核表达载体pET-21a中，并在大肠杆菌BL21中通过IPTG的诱导成功表达。通过噬菌体展示肽库对淋巴囊肿病毒（LCDV）抗原表位进行了生物淘筛，对所获阳性克隆模拟表位进行了序列、系统关系结构及化学性质等分析，基本推断生物淘筛所获得的模拟表位是针对LCDV的相应肽段，且这些模拟表位的一个突出特征是含有大量的亲水性氨基酸。其中融合肽段RQAPELMLSTTS、ARHRPKLPYTHT与靶分子亲和力很高，产生了较高的丰度。另外，对应于LCDV囊膜糖蛋白、MCP、TNFR等蛋白的模拟表位具有较好的应用前景，LCDV基因组中的ORF119、234、075等也具有重要的免疫研究价值。