1.IFN-α2b对尿道瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响 2.表现为LUTS的良性前列腺增生症钬激光治疗暨对性功能影响的评价

背景尿道狭窄是泌尿外科常见疾病，多见于男性。病因上分为三类：1．先天性尿道狭窄，包括尿道粘膜横膈、尿道瓣膜形成、精阜增生、尿道外口狭窄；2．炎症性尿道狭窄，包括尿道结核、淋病、包茎继发感染或长期留置导尿管可导致非特异性炎症性尿道狭窄；3．外伤性尿道狭窄，由骨盆骨折、骑跨伤、会阴部踢伤等；医源性尿道狭窄，由尿道内器械操作造成，多位于前尿道阴囊阴茎交界处至球膜部尿道之间。目前随着腔内泌尿外科的发展，医源性尿道狭窄的发病率日益增加。尿道损伤部位修复过程中，会经历炎症反应、成纤维细胞增生、基质合成和降解几个过程。而瘢痕组织过度增生则会造成尿道狭窄。尿道瘢痕病理显示尿道狭窄与胶原及其它细胞外基质过度沉积有关。尿道狭窄的治疗有尿道扩张，尿道内冷刀、激光内切开，内支架应用，开放性手术切除狭窄段。尿道扩张、激光、内支架、内切开术、开放性手术的成功率分别为60％，50％，56％，40％和90％，开放性手术要求精细、甚至复杂。临床最常用的方法仍是尿道扩张，但是它的低成功率和高复发率使人们一直在寻求一种新的更有效治疗方法。成纤维细胞在组织的创伤修复中起着重要的作用。1993年，Baskin等成功培养了胎牛的尿道成纤维细胞，确定了尿道成纤维细胞的培养条件、方法、细胞鉴定以及基质成分的测定。目前发现成纤维细胞在肉芽形成、伤口收缩、基质合成、伤口修复、瘢痕形成等方面起着重要作用，可合成Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅴ型胶原，并且可合成纤维连结蛋白(FN)，是尿道狭窄发生、发展的重要因素。细胞因子是多种细胞分泌的能调节细胞生长分化、免疫功能、参与炎症发生和创伤愈合的小分子多肽的统称，包括白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子，生长因子等等，组成了相互作用、相互影响的多维网络系统，被认为是继神经介质、激素后，体内第三大类调节分子，形成神经-内分泌-免疫系统轴心，调节人体的生理活动。TGF-β是已确定的成纤维细胞的强效趋化因子，可以通过旁分泌和自分泌直接或间接、单独或协同、同时或不同时相作用于炎症及修复细胞，产生细胞的趋化性迁移、增生分化、细胞外基质合成及分泌三类重要的生物学效应。TGF-β可直接作用于成纤维细胞对细胞外基质的蛋白合成，Appleton发现体外低浓度的TGF-β即可刺激成纤维细胞合成大量胶原基质；并作用于单核-巨噬细胞、内皮细胞和肥大细胞等，通过这些细胞对成纤维细胞的影响而发挥作用。同时TGF-β还可以增强如纤维结合蛋白及其受体、各类胶原和蛋白酶抑制剂等基因表达，增强结缔组织的收缩。在创面愈合细胞基质的形成和重塑阶段，TGF-β在胶原的合成和降解以及结缔组织取代肉芽组织的过程也起着重要的调节作用。干扰素(interferon，IFN)于1957年被英国伦敦国立医学研究所的AlickIsaacs和Jean Lindenman发现，20世纪60年代后期对人IFN及其临床应用的研究证实：IFN至少有20多种生理功能。作为一类具有抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节等多种生物活性的细胞因子，近来发现干扰素对人体正常皮肤成纤维细胞以及硬皮病皮肤组织成纤维细胞等都具有肯定的胶原合成抑制作用，显示了在纤维化疾病治疗方面的可能前景，Berman于1989年首先报告局部注射IFN-α2b治疗1例瘢痕疙瘩取得良效。以后陆续又有应用IFN治疗肥厚性瘢痕和硬皮病等真皮纤维化疾病取得一定效果的报告。而IFN-α2b能否抑制尿道瘢痕成纤维细胞胶原合成至今尚未见报道，在本研究中，我们将探索IFN-α2b对尿道瘢痕成纤维细胞生物活性的影响。目的：本实验首先进行尿道瘢痕成纤维细胞原代培养及鉴定，通过传代，建立尿道瘢痕成纤维细胞系。观察IFN-α2b对尿道瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响，并探讨其作用机制，为临床上应用IFN-α2b治疗尿道狭窄提供实验及理论依据。方法：切取尿道瘢痕通过组织块法进行原代培养，用波形蛋白单克隆抗体进行免疫组化染色鉴定，镜下观察成纤维细胞的生长形态并进行传代、保存。不同剂量IFN-α2b(0 IU／ml，100 IU／ml，500 IU／ml，1000 IU／ml)干预培养成纤维细胞72h，收集细胞及上清液，四甲基偶氮唑蓝(Methylthiazolyl tetrazoliumbromide，MTT)比色法测定检测细胞OD值、显微镜观察细胞形态结构、流式细胞仪(Flow Cytometer，FCM)检测细胞周期，羟脯氨酸比色法检测成纤维细胞培养上清液胶原含量。采用普通逆转录聚合酶链反应(Reverse-transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR)方法检测TGF-β1、Ⅰ及Ⅲ型胶原mRNA的基因表达水平的变化。结果：尿道瘢痕成纤维细胞为贴壁生长型细胞，在倒置显微镜下观察，呈放射状生长，而后逐渐融合成片，细胞呈梭形或不规则多角形，胞质向外伸出2～3个长短不一的突起，细胞界限清楚，生长排列较规律，多呈放射状、编织状或漩涡状走行，5～7天可传代1次。波形蛋白阳性表达。随着IFN-α2b浓度的增加，尿道瘢痕成纤维细胞表现为1、OD值均下降(p＜0.01)，IFN-α2b的浓度与OD值改变存在剂量-效应关系；2、细胞形态结构上差异不明显；3、处于G0+G1期的细胞数百分比上升，S期和G2+M期的细胞数百分比都下降(p＜0.01)；4、~3H-脯氨酸掺入量逐渐减少(p＜0.01)；5、TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA呈明显下调(p＜0.01)。结论：1、IFN-α2b可在细胞水平呈剂量依赖性抑制尿道瘢痕成纤维细胞增殖，并在分子水平呈剂量依赖性抑制其TGF-β1、Ⅰ及Ⅲ型胶原mRNA的表达。2、IFN-α2b可多环节抑制胶原合成和分泌。3、在抑制尿道瘢痕形成有着广阔的应用前景。背景下尿路症状(lower urinary tract symptoms，LUTS)是临床常见征候群。老年男性多见，多数是由于前列腺良性增生(benign prostatic hyperplasia，BPH)造成。随着泌尿外科腔内手术的开展，医源性尿道狭窄也越来也多，更多的后尿道狭窄的年轻患者也表现为下尿路综合征。近来，有研究指出由前列腺增生导致的下尿路综合征可伴有勃起功能障碍(erectile dysfunction，ED)。有严重下尿路梗阻的患者44.2％发生过不成功的性生活，而中度梗阻的患者则有13.1％出现。更多的资料显示，下尿路梗阻导致的性功能障碍可包括射精障碍、性欲下降、满意度降低。越来越多的临床资料显示，前列腺的各种治疗方法均或多或少的对性功能产生一定的影响。其对性功能的影响主要包括勃起功能的下降，射精功能的下降，逆行射精，射精量减少，勃起或射精疼痛不适，性欲改变等。欧洲的一项统计资料表明开放前列腺摘除术、经尿道前列腺电切术(Transurethral resection ofprostate，TURP)、经尿道前列腺切开术(Transurethral incision of prostate，TUIP)术后勃起功能障碍发生率分别为15.6％，13.6％和4.6％。药物治疗对性功能的影响与手术比较相对较小。我们认为评价一项前列腺手术的临床疗效必须包括其对性功能的影响，人们在选择前列腺的治疗方式时，也应该综合考虑各种治疗方法对性功能的影响，尤其在我国人口老龄化进程不断加速和生活质量日益提高的今天，更具现实意义。钬激光前列腺剜除术(Ho：YAG laser enucleation of the prostate，HOLEP)是一项新发展起来的应用于泌尿外科的腔内技术。HOLEP可以安全有效地快速消除尿路梗阻症状，具有出血少、住院时间短、留置尿管时间短等优势。但作为泌尿外科应用的一种新技术，目前国内外关于HOLEP对术后患者性功能的影响尚未见报道，我们特做了以下的研究来探讨老年男性BPH患者下尿路梗阻症状与性功能的相关性，评估HOLEP对老年男性性功能的影响。目的：探讨老年男性BPH患者下尿路梗阻症状与性功能的相关性，评估HOLEP对老年男性性功能的影响。方法：选择自2004年1月至2006年9月行钬激光前列腺剜除术108例BPH患者，平均年龄69.2(54～82)。分别于术前、术后6个月进行随访，随访内容包括：一般情况(患者年龄、有无慢性病、前列腺体积)，国际前列腺症状评分表(IPSS)，性功能调查问卷(包括性欲、勃起硬度、射精量、射精疼痛或不适感及对性生活的满意度)。分别对患者术前及术后6个月的性功能进行评估，以临床客观指标及病人满意度为评判标准。结果：患者年龄同LUTS呈正相关，r=0.313，(p＜0.01)。患者年龄与IIEF呈负相关，r=-0.478，(p＜0.01)。而LUTS与患者IIEF呈负相关，r=-0.669，(P＜0.01)。术前55％患者对性欲满意，HOLEP术后6个月57％满意，23.5％的患者术前后均无性欲。术前37％的患者对勃起满意，术后6个月为40％。术前30％患者对性生活满意，术后6个月32％满意，而术前阳痿率为33％，术后6个月则升至35％。术后有正常性生活的患者70％出现逆向射精，精液量减少、不粘稠。结论：1．随着年龄增长，男性患者LUTS发生率升高，性功能下降。2．钬激光治疗前列腺增生不会影响患者性功能，但易造成逆向射精和精液量减少。