CETP-629C/A基因多态性与阿托伐他汀钙对冠心病患者调脂疗效的相关性研究

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目的:本文旨在研究中国天津地区人群CETP-629C/A基因多态性、血清CETP含量、脂蛋白代谢及与CHD发病风险相互之间的关系;采用体外分子克隆重组研究方法,探讨启动子区基因变异对CETP转录活性的影响;观察他汀类药物对CETP-629C/A不同基因型的冠心病患者的血脂调节作用,为探讨中国人冠心病发病的分子遗传基础提供理论依据,同时能为心血管疾病患者提供更科学及更具体的个性化治疗。方法:1. CETP-629C/A基因多态性与脂蛋白代谢和CHD的相关性:采用以医院为基础的成组病例对照研究方法,研究对象来自2010年10月~2011年10月天津市胸科医院心内科住院并接受冠状动脉造影检查的患者,天津地区汉族人群,根据冠脉造影结果分为冠心病组429例,正常对照组275例。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测CETP-629C/A基因型,同时采用ELISA方法测定其血清CETP的含量,分析CETP-629C/A基因多态性、血清CETP含量、脂蛋白代谢及与CHD发病风险相互之间的关系。2. CETP启动子区-629C/A基因变异在真核细胞中对转录活性的影响:选取第一部分实验中CETP-629CC和-629AA纯合子基因,通过PCR方法扩增CETP启动子区域-745~+31bp基因片段。纯化后,将该片段与作为中间环节pUCm-T载体相连接,构建pUC-CETP/-629CC和pUC-CETP/-629AA重组质粒,限制性核酸内切酶和DNA测序鉴定连接正确后,采用限制性核酸内切酶SacⅠ、BglⅡ进行特定位点的酶切,将酶切后片段与pGL2-Basic质粒通过T4-DNA连接酶相连接,构建pGL2-CETP/-629CC和pGL2-CETP/-629AA重组质粒,重组质粒DNA测序正确后,用阳离子脂质体转染技术,将重组质粒转染到HepG2细胞,进行体外细胞培养。收集细胞测定细胞中荧光素酶报告基因的强度,计算不同重组质粒荧光素酶相对活性来反映CETP不同基因型转录活性。3. CETP-629C/A基因多态性与阿托伐他汀钙对CHD患者血脂调节作用的关系:所有CHD患者入院后给予阿托伐他汀钙(美国辉瑞制药有限公司提供)20mg,每晚1次口服。治疗3个月后,复查血脂水平,观察他汀类药物对携带CETP-629C/A不同基因型冠心病患者的血脂调节作用,建立他汀类药物的适用人群。结果:1.天津地区汉族人群CETP基因-629位点A等位基因频率为0.408,明显低于国内其他地区及国外人群(0.479~0.701,P<0.05)。2.突变型纯合子AA基因型血清CETP浓度低于野生型纯合子CC基因型(P>0.05),而HDL-C水平显著增高(P<0.05)。3.血清CETP浓度与HDL-C水平呈负向变化趋势,其相关性未达到统计学意义(P>0.05)。4.冠心病组及对照组CETP-629C/A各基因型和等位基因分布的差别有统计学意义(P<0.001);携带CA/AA基因型和携带A等位基因个体发生冠心病的危险性增加,OR(95%CI)值分别为4.627(3.163~6.769)、8.779(4.799~16.059)和3.173(2.453-4.104),调整了年龄、性别、BMI、吸烟、高血压、糖尿病和血脂代谢障碍等混杂因素后这种关联仍然存在。结果显示CETP-629C→A突变与CHD的发病风险密切相关,变异基因型(CA和AA)是CHD发病风险的独立危险因素,CETP-629A等位基因可能是中国天津地区汉族人群的冠心病遗传易感基因。但是CETP-629C/A基因多态性与冠状动脉血管病变程度不相关(χ2=3.588,P>0.05)。5.多因素非条件logistic回归冠心病的主要危险因素包括:既往有糖尿病史、吸烟、血清FBG、LDL-C、LP(a)水平高、血清HDL-C水平低、携带CETP基因CA/AA基因型。6. pGL2-CETP/-629AA转染HepG2细胞后表达的荧光素酶相对活性明显低于pGL2-CETP/-629CC表达活性(P<0.05),在体外情况下A等位基因的转录活性显著低于C等位基因。7.阿托伐他汀钙对CHD患者的血脂调节作用与CETP基因多态性具有相关性,CC基因型与CA、AA基因型比较,LDL-C水平下降最明显为35.47%(均P<0.05),LP(a)水平下降最明显为34.86%(均P<0.05),HDL-C水平升高最明显为9.49%(均P>0.05),-629CC基因型携带者有更好的他汀类调脂效果。结论:1.天津地区汉族人群CETP-629C/A基因型和等位基因频率分布与国内其他地区及国外人群有明显差异。2.体外报告基因实验结果表明在体外情况下变异型A等位基因的转录活性显著低于野生型C等位基因,CETP基因-629C/A位点是功能性位点,可以调节CETP启动子的转录活性,进而影响血清CETP浓度。临床部分结果提示变异型纯合子AA基因型血清CETP浓度低于野生型纯合子CC基因型,与体外试验结果的趋势一致。3. CETP-629C/A基因多态性对血清HDL-C水平有显著影响,AA基因型血清HDL-C水平比CC基因型显著增高。4.血清CETP浓度与HDL-C水平仅呈负向变化趋势。5.天津地区汉族人群CETP-629C→A突变与CHD的发病风险密切相关,变异基因型(CA和AA)是CHD发病风险的独立危险因素,-629A等位基因可能是中国天津地区汉族人群的冠心病遗传易感基因。6. CETP基因-629C→A突变导致CETP浓度及活性降低、血清HDL-C水平的升高不能完全改变个体对CHD的易患性。7. CETP基因-629C/A多态性与阿托伐他汀钙对冠心病患者的血脂调节作用具有相关性,-629CC基因型携带者LDL-C、LP(a)水平降低更明显,有更好的他汀类调脂效果。
中文摘要第4-7页
Abstract第7-8页
缩略语第12-14页
前言第14-17页
    研究现状、成果第14-16页
    研究目的、方法第16-17页
一、CETP-629C/A基因多态性与脂蛋白代谢和CHD的相关性第17-45页
    1.1 对象和方法第17-23页
        1.1.1 研究对象第17-18页
        1.1.2 主要试剂和仪器第18-19页
        1.1.3 研究方法第19-22页
        1.1.4 统计学分析第22-23页
    1.2 结果第23-34页
        1.2.1 CHD组与对照组一般资料比较第23-26页
        1.2.2 CETP -629C/A基因多态性分析第26-28页
        1.2.3 CETP -629C/A不同基因型血脂和CETP浓度的比较第28-30页
        1.2.4 CETP -629C/A基因多态性与CHD的关系第30-33页
        1.2.5 CHD危险因素多因素非条件logistic回归第33-34页
    1.3 讨论第34-43页
        1.3.1 CETP的结构和生理功能第35-37页
        1.3.2 CETP -629C/A基因多态性第37-38页
        1.3.3 CETP -629C/A基因多态性与脂蛋白代谢异常第38-40页
        1.3.4 CETP -629C/A基因多态性与CHD第40-42页
        1.3.5 CETP-629C/A基因多态性、CETP浓度、HDL-C水平与CHD发生风险的相关性第42-43页
    1.4 小结第43-45页
二、CETP启动子区-629C/A基因变异在真核细胞中对转录活性的影响第45-82页
    2.1 对象和方法第45-60页
        2.1.1 实验材料第45-50页
        2.1.2 实验方法第50-60页
        2.1.3 统计学分析第60页
    2.2 结果第60-76页
        2.2.1 目的基因CETP片段的获得第60-62页
        2.2.2 pUC-CETP重组质粒的鉴定第62-64页
        2.2.3 pGL2-CETP重组质粒的鉴定第64-75页
        2.2.4 pGL2-CETP重组质粒转染HepG2载体细胞第75-76页
    2.3 讨论第76-80页
        2.3.1 双荧光素酶报告基因实验系统的评估第76-79页
        2.3.2 荧光素酶报告基因的构建对评价CETP-629C/A不同基因型转录活性的作用第79-80页
    2.4 小结第80-82页
三、CETP-629C/A基因多态性与阿托伐他汀钙对CHD患者血脂调节作用的关系第82-95页
    3.1 对象和方法第82页
        3.1.1 研究对象第82页
        3.1.2 研究方法第82页
        3.1.3 统计学分析第82页
    3.2 结果第82-85页
        3.2.1 阿托伐他汀钙调脂治疗前后血脂水平的变化第82-83页
        3.2.2 CETP-629C/A基因型与阿托伐他汀钙对CHD患者调脂作用的影响第83-85页
    3.3 讨论第85-93页
        3.3.1 TaqIB基因多态性与他汀类药物调脂效果的关系第86-88页
        3.3.2 -629C/A基因多态性与他汀类药物调脂效果的关系第88-89页
        3.3.3 其它基因多态性与他汀类药物调脂效果的关系第89-90页
        3.3.4 CETP抑制剂的研究进展第90-93页
    3.4 小结第93-95页
全文结论第95-97页
论文创新点第97-98页
参考文献第98-109页
发表论文和参加科研情况说明第109-110页
综述第110-124页
    胆固醇酯转运蛋白基因多态性与他汀类药物调脂疗效的研究进展第110-118页
    综述参考文献第118-124页
致谢第124页
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