中文摘要 | 第12-14页 |
ABSTRACT | 第14-15页 |
1 前言 | 第16-25页 |
1.1 子宫内膜异位症 | 第16-19页 |
1.1.1 子宫内膜异位症的发病机制 | 第16-17页 |
1.1.2 子宫内膜异位症的高危因素 | 第17-18页 |
1.1.3 子宫内膜异位症的诊断及治疗方案 | 第18-19页 |
1.2 雌激素受体在子宫内膜异位症中的生理功能 | 第19-21页 |
1.3 子宫内膜异位症中的EMT现象 | 第21页 |
1.4 炎症反应在子宫内膜异位症中的作用 | 第21-23页 |
1.4.1 炎症反应促进子宫内膜异位症的机制 | 第21-22页 |
1.4.2 内源性抑炎因子脂氧素抑制内异症的发生发展 | 第22-23页 |
1.4.3 脂氧素对雌激素受体的调节 | 第23页 |
1.5 研究内容及研究意义 | 第23-25页 |
1.5.1 研究内容 | 第23-24页 |
1.5.2 研究意义 | 第24-25页 |
2 实验试剂与仪器 | 第25-33页 |
2.1 主要材料与试剂 | 第25-31页 |
2.1.1 主要试剂 | 第25-28页 |
2.1.2 实验材料 | 第28-29页 |
2.1.3 药品及实验主要试剂的配置 | 第29-31页 |
2.2 实验主要仪器 | 第31-33页 |
3 实验方法 | 第33-44页 |
3.1 原代培养子宫内膜细胞 | 第33-34页 |
3.1.1 相关试剂及配制 | 第33页 |
3.1.2 细胞的分离和培养 | 第33-34页 |
3.2 细胞加药处理和分组 | 第34-35页 |
3.3 Western blot 蛋白质免疫印迹法 | 第35页 |
3.4 免疫组织化学法 | 第35-36页 |
3.5 免疫细胞荧光 | 第36-37页 |
3.6 实时荧光定量PCR(Real Time PCR) | 第37-39页 |
3.7 ERβ野生型与突变型(S105A,S105E)慢病毒载体构建 | 第39-41页 |
3.7.1 ERβ野生型与突变型干扰片段的合成与构建 | 第39-40页 |
3.7.2 质粒转化与扩增 | 第40-41页 |
3.7.3 慢病毒包装 | 第41页 |
3.7.4 慢病毒转染与稳定细胞株的筛选 | 第41页 |
3.8 荧光素酶报告基因活性测定 | 第41-42页 |
3.8.1 细胞培养及质粒转染 | 第41-42页 |
3.8.2 荧光素酶活性检测 | 第42页 |
3.9 MTS实验 | 第42页 |
3.10 细胞迁移实验 | 第42-43页 |
3.11 细胞侵袭实验(含Matrigel) | 第43页 |
3.12 统计学分析 | 第43-44页 |
4 实验结果 | 第44-62页 |
4.1 ERβ S105位点磷酸化在内异症患者中的分布及临床意义 | 第44-47页 |
4.1.1 ERβ S105位点磷酸化水平在子宫内膜异位症患者中的分布情况 | 第44-45页 |
4.1.2 ERβ S105位点磷酸化在子宫内膜异位症患者中的临床意义 | 第45-47页 |
4.2 ERβ磷酸化位点突变体S105A及S105E的构建及鉴定 | 第47-49页 |
4.2.1 构建ERβ野生型与突变型(S105A/S105E)慢病毒载体 | 第47-48页 |
4.2.2 鉴定 | 第48-49页 |
4.3 ERβ S105位点磷酸化对细胞生物学行为的影响 | 第49-54页 |
4.3.1 S105位点的磷酸化可影响ishikawa细胞中ERβ的转录激活 | 第49-50页 |
4.3.2 ERβ S105位点磷酸化对ishikawa细胞增殖能力的影响 | 第50-51页 |
4.3.3 ERβ S105位点持续磷酸化可抑制ishikawa细胞的迁移及侵袭能力 | 第51-53页 |
4.3.4 ERβ S105位点的磷酸化对ishikawa细胞中EMT进程的影响 | 第53-54页 |
4.4 体外探究IL-1β和LXA_4干预对子宫内膜细胞ERβ-pS105水平的影响 | 第54-62页 |
4.4.1 原代细胞培养及形态学的分析 | 第54-55页 |
4.4.2 免疫细胞化学鉴定细胞类型 | 第55-56页 |
4.4.3 IL-1β干预对子宫内膜细胞ERβ-pS105水平的影响 | 第56-57页 |
4.4.4 LXA4对IL-1β诱导ERβ-pS105水平的调节作用 | 第57-58页 |
4.4.5 IL-1β通过p38 MAPK及JNK通路诱导ERβ-pS105的水平 | 第58-59页 |
4.4.6 LXA4及p38 MAPK抑制剂联合处理对ERβ-pS105水平的影响 | 第59-62页 |
5 讨论 | 第62-67页 |
5.1 ERβ S105位点磷酸化在内异症患者中的分布及其临床意义 | 第62-63页 |
5.1.1 ERβ S105位点磷酸化在内异症患者中的分布情况 | 第62页 |
5.1.2 ERβ S105位点磷酸化程度在内异症患者中异常增多的临床意义 | 第62-63页 |
5.1.3 Ishikawa细胞系在内异症体外实验中的应用 | 第63页 |
5.2 S105突变体可调控Ishikawa细胞中雌激素反应元件的转录活性 | 第63-64页 |
5.3 ERβ S105位点磷酸化对下游的作用效应 | 第64-65页 |
5.3.1 ERβS105位点磷酸化对Ishikawa细胞生物学行为的影响 | 第64-65页 |
5.3.2 EMT | 第65页 |
5.4 LXA_4调节内异症进程的分子机制 | 第65-67页 |
6 结论 | 第67-68页 |
展望 | 第68-69页 |
参考文献 | 第69-76页 |
致谢 | 第76-77页 |