目的为了寻找胰腺癌基因治疗新方法,利用基因克隆、慢病毒载体构建、细胞转染等方法使人CDld基因稳定转染胰腺癌细胞株PANC-1,为后期以CDld-NKT为桥梁,研究细胞免疫原性变化、免疫上下游通路奠定基础。方法利用基因克隆技术克隆出人CDld基因,连接在pEASY-Tl simple cloning vector上,构建成pEASY-Tl simple-CDld质粒,再进行序列测定；利用基因重组技术将人CDld基因连接慢病毒载体PCDH-CMV-MCS-EFl-copGFP,进行病毒包装、滴度测定后浓缩纯化；通过慢病毒转染预实验确定MOI,进行人CDld重组慢病毒载体转染胰腺癌PANC-1细胞株。结果克隆出人CD1d基因,成功构建pEASY-Tl simple-CDld质粒,测序结果显示与人类基因库中CD1d基因序列一致；成功构建慢病毒载体质粒PCDH-CMV-MCS-EFl-copGFP-CDld,经病毒包装后得到携带CD1d的重组慢病毒颗粒Lenti-hCDld,浓缩后病毒滴度达到4.4×108TU/ml；重组慢病毒颗粒Lenti-hCDld成功转染胰腺癌细胞株PANC-1。结论可以通过基因克隆、慢病毒载体构建、细胞转染等方法稳定转染CD1d基因至胰腺癌细胞株PANC-1,这为后期以CDld-NKT为桥梁,进行细胞免疫原性变化、免疫上下游通路的研究和胰腺癌的基因治疗奠定了基础。
