伤寒多糖结合疫苗的生物合成研究

结合疫苗论文 伤寒沙门氏菌论文 合成生物学论文 重组EPA论文
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摘要第9-10页
ABSTRACT第10-11页
第1章 前言第12-16页
    1.1 伤寒沙门氏菌的致病与传播第12-13页
    1.2 伤寒的防治策略第13-14页
    1.3 多糖疫苗第14页
    1.4 糖蛋白疫苗第14-15页
    1.5 选题目的与意义第15-16页
第2章 伤寒O-连接糖基化修饰途径的构建与IPTG诱导表达及检测第16-28页
    2.1 研究背景第16页
    2.2 材料与方法第16-23页
        2.2.1 菌株与质粒第16-17页
        2.2.2 主要试剂和耗材第17页
        2.2.3 主要仪器与分析软件第17-18页
        2.2.4 培养基及相关溶液的配制第18页
        2.2.5 waaL基因缺失突变株的构建第18-21页
        2.2.6 waaL回复突变株的构建第21页
        2.2.7 缺失突变株和回复突变株在分子水平上的验证第21页
        2.2.8 缺失突变株和回复突变株在表型上的验证第21-22页
        2.2.9 野生株、缺失株和回复株在生长状态上的测定第22页
        2.2.10 野生株、缺失株和回复株在生化试验上的比较第22页
        2.2.11 重组菌株的构建与检验第22页
        2.2.12 PglL与rEPAN29的诱导表达与检测第22-23页
        2.2.13 蛋白免疫印迹(Western Blot)第23页
    2.3 结果第23-27页
        2.3.1 缺失株和回复株在分子水平上的验证第23-24页
        2.3.2 缺失株和回复株在表型上的验证第24页
        2.3.3 野生株、缺失株和回复株在生长状态上的测定第24页
        2.3.4 野生株、缺失株和回复株在生化试验上的比较第24-26页
        2.3.5 PCR验证重组菌第26页
        2.3.6 PglL与rEPAN29在 50096△waaL中的诱导表达第26-27页
    2.4 讨论第27-28页
第3章 重组菌的双向电泳检测第28-35页
    3.1 研究背景第28页
    3.2 材料与方法第28-31页
        3.2.1 菌株与质粒第28-29页
        3.2.2 主要试剂和耗材第29页
        3.2.3 主要仪器与分析软件第29页
        3.2.4 培养基及相关溶液的配制第29-30页
        3.2.5 全菌蛋白样品的制备第30页
        3.2.6 双向电泳样品的纯化与上样前处理第30页
        3.2.7 双向电泳:等电聚焦第30-31页
        3.2.8 双向电泳:SDS-PAGE第31页
        3.2.9 蛋白点分析、胶内酶切与质谱分析第31页
    3.3 结果第31-33页
        3.3.1 重组菌的双向电泳的图谱比较第31-32页
        3.3.2 差异蛋白质谱结果鉴定第32-33页
    3.4 讨论第33-35页
第4章 伤寒O-多糖蛋白复合物的分离与纯化第35-39页
    4.1 研究背景第35页
    4.2 材料与方法第35-37页
        4.2.1 菌株第35页
        4.2.2 主要试剂与耗材第35-36页
        4.2.3 主要仪器与分析软件第36页
        4.2.4 培养基及相关溶液的配制第36页
        4.2.5 IPTG诱导与菌液的预处理第36页
        4.2.6 Chelating亲和层析柱的初步纯化第36-37页
        4.2.7 初步纯化样品的除盐第37页
        4.2.8 SDS-PAGE检测初步纯化后的糖蛋白样品第37页
        4.2.9 ProteinPak DEAE8HR阴离子交换层析柱进一步纯化第37页
        4.2.10 Superdex 75层析柱的凝胶过滤精细纯化第37页
        4.2.11 SDS-PAGE检测精细纯化后糖蛋白样品第37页
    4.3 结果第37-38页
        4.3.1 初步纯化后糖蛋白样品的检测第37-38页
        4.3.2 精细纯化后糖蛋白样品的检测第38页
    4.4 讨论第38-39页
第5章 糖蛋白纯化产物的免疫原性评价第39-45页
    5.1 研究背景第39页
    5.2 材料与方法第39-43页
        5.2.1 菌株与试验动物第39页
        5.2.2 主要试剂与耗材第39-40页
        5.2.3 主要仪器与分析软件第40页
        5.2.4 培养基及相关溶液的配制第40页
        5.2.5 伤寒菌脂多糖(LPS)的提取与检测第40-41页
        5.2.6 伤寒菌O-多糖(OPS)的制备与检测第41页
        5.2.7 LPS、OPS以及纯化后糖蛋白的糖定量第41页
        5.2.8 免疫样品的制备第41页
        5.2.9 小鼠的免疫试验第41-42页
        5.2.10 小鼠血清的采集第42页
        5.2.11 间接ELISA法检测血清中抗体滴度第42-43页
    5.3 结果第43-44页
        5.3.1 伤寒菌LPS、OPS的银染检测第43页
        5.3.2 LPS、OPS以及纯化后糖蛋白的糖定量第43页
        5.3.3 ELISA检测血清中抗体滴度第43-44页
    5.4 讨论第44-45页
第6章 结论与展望第45-47页
致谢第47-48页
参考文献第48-51页
作者在学期间取得的学术成果第51-52页
附录A 核酸试剂盒操作步骤第52-56页
附录B 蛋白试剂盒操作步骤第56页
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