Tα1在原核细胞中的融合表达及活性研究

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胸腺素α1(Tα1)是由动物或人胸腺组织分泌的一种多肽激素,由28个氨基酸组成,等电点4.2,分子量3108d。Tα1是一种生物反应调节因子,主要是T淋巴系统的免疫增强剂,用于免疫缺陷和免疫受抑制的疾病。当病人感染某些病毒如HIV、HBV或癌症以及经过放疗或化疗后,其免疫系统往往会被逐渐抑制乃至破坏而不能发挥对病毒或癌症细胞的正常杀伤作用。Tα1可以恢复T淋巴细胞的功能并促进成熟T细胞的增殖,促进淋巴细胞在病原组织及癌细胞周围的聚集,促进淋巴因子及淋巴因子受体的产生,这样就大大增强了对病毒和癌症的抵抗能力。 由于Tα1的肽链较短,很难利用基因工程方法实现直接表达,所以目前商用的多是化学合成产品,价格较昂贵,而从动物胸腺提取的Tα1纯度和活性都较低,使其临床应用受到限制。 为了探索大规模生产Tα1或相近生物活性产物的可能性,我们采取融合表达方式设计构建了PET28-a-Tα1融合表达载体,将重组质粒转入大肠杆菌BL21,对工程菌进行培养并对融合蛋白进行纯化,而后对融合蛋白的活性进行测定,从而为进一步研究奠定了基础。
中文摘要第4-5页
英文摘要第5页
目录第6-8页
第一章 引言第8-16页
    一、Tα1的分子生物学第8页
    二、Tα1的分布第8-9页
    三、Tα1的作用机制第9-11页
        (一) Tα1对于胸腺细胞调亡的调节第9-10页
        (二) Tα1作为BRM的作用机制第10-11页
    四、Tα1在临床上的应用第11-13页
        (一) 应用范围第11-13页
            1、癌症的治疗第11-12页
            2、HBV的治疗第12页
            3、HIV的治疗第12页
            4、其他第12-13页
        (二) 使用方法第13页
    五、Tα1的制备第13-14页
        (一) 从动物胸腺提取第13页
        (二) 化学合成法第13-14页
        (三) 基因工程方法第14页
    六、Tα1的活性检测第14-15页
    七、本论文的研究目的和意义第15-16页
第二章 实验材料和方法第16-21页
    一、实验材料第16页
        (一) 材料和试剂第16页
        (二) 仪器设备第16页
    二、实验方法第16-21页
        (一) 重组质粒构建第16-17页
        (二) 原核表达第17-19页
            1、制备感受态细胞第17页
            2、转化第17页
            3、小提质粒第17-18页
            4、小量表达及分析第18页
            5、大量诱导及蛋白纯化第18-19页
        (三) 活性检测第19-21页
第三章 结果与讨论第21-26页
    一、质粒构建及其验证第21页
    二、原核表达第21-22页
    三、大量诱导及蛋白纯化第22-23页
    四、融合蛋白的活性测定第23-24页
    五、讨论第24-26页
第四章 结论第26-27页
参考文献第27-30页
致谢第30页
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