禽流感(Avian influenza, AI)是由正黏病毒科(Orthomyxoviridae)、流感病毒属(Influenzavirus)、甲型流感病毒引起的禽类的感染和/或疾病综合征,被国际兽医局确定为甲型烈性传染病。自1878年首次发现以来,已经造成全球范围内的多次爆发,感染的宿主范围不断扩大,已经不仅仅能够感染家禽、野鸟和部分哺乳动物,甚至在1997年,香港发生了人感染H5N1禽流感病毒并造成死亡的事件,严重威胁公共卫生健康,给公众生命财产带来了巨大的损失。禽流感病毒亚型众多,不同毒株间毒力差异很大,并不是所有亚型都能引起禽流感的爆发和流行,至今已发现的甲型流感病毒根据血凝素(HA)和和神经氨酸酶(NA)抗原的差异,将血凝素(HA)分为16个亚型(H1-H16),神经氨酸酶(NA)分为9个亚型(N1-N9), H9N2亚型禽流感病毒广泛分布于禽类、野鸟和一些哺乳动物之中,也能够感染人类,其中野鸟被认为是H9N2亚型禽流感病毒的自然宿主,H9N2亚型禽流感病毒广泛存在变异重组现象,对养殖产业和公众生命财产安全具有极大的威胁,被国际卫生组织(WHO)认为是潜在的、可能引起下一轮爆发的禽流感病毒,基于以上原因,本研究中对分离到的17株病毒中11株H9N2病毒的分子生物学特性、基因组序列和遗传进化关系进行了分析,旨在从分子水平上了解我国南方H9N2流感毒株的变异情况和导致其不同生物学特性的原因,研究其可能的来源及分子进化路径。在国内南方流行病调查期间,我们从野生赤颈鸭(Anas penelope)、雉鸡(Phasianus colchicus)、斑嘴鸭(Anas poecilorhyncha)和绿头鸭(Anas platyrhynchos)的拭子样品中分离并鉴定到17株H9N2亚型禽流感病毒,分别命名为：A/Anas penelope/Shanghai/23/11(H9N2), A/Phasianus colchicus/Jiangxi/30/11(H9N2), A/Phasianus colchicus/Jiangxi/31/11(H9N2), A/Anas poecilorhyncha/Jiangxi/32/11(H9N2), A/Anas poecilorhyncha/Jiangxi/33/11(H9N2), A/Anas poecilorhyncha/Jiangxi/34/11(H9N2) A/Anas poecilorhyncha/Jiangxi/35/11(H9N2), A/Anas poecilorhyncha/Jiangxi/36/11(H9N2)A/Anas poecilorhyncha/Jiangxi/37/11(H9N2), A/Anas platyrhynchos/Jiangxi/38/11(H9N2), A/Anas platyrhynchos/Jiangxi/39/11(H9N2), A/Anas platyrhynchos/Jiangxi/41/11(H9N2), A/Anas platyrhynchos/Jiangxi/43/11(H9N2), A/Anas platyrhynchos/Jiangxi/46/11(H9N2)。通过设计特异引物进行扩增、克隆和测序,得到17株分离株中11株的PB2、PB1、 PA、HA、NP、NA、M和NS8个片段的序列信息,进而对8个基因片段的分子进化关系进行了分析,分析结果表明这11株病毒和2009年在香港分离的2株人源H9N2病毒(A/HongKong/35820/2009和A/HongKong/33982/2009)具有很高的氨基酸同源性,具有相同的祖先来源,而且,该11株H9N2病毒为G1-like型、Ck/Bei94-like型和Y439-like型病毒的三重重组病毒,其中,NA基因来源于Ck/Bei94-like型H9N2病毒,PA基因来源于Y439-like型H9N2病毒,而其余6个基因来源于G1-like型H9N2病毒。在小鼠致病性研究实验中,用分离到的H9N2病毒(A/Anas platyrhynchos/Jiangxi/39/11)感染无特异病原体的小鼠(SPF),组织切片结果和Real-time PCR实验的结果表明我们所获得的H9N2亚型病毒能够感染小鼠并在小鼠的肺部和气管组织中进行自由复制,小鼠在感染H9N2病毒之后的3-6天内,引起20-40%的死亡率。表明野生鸭类作为宿主,在H9N2病毒重组中起到了重要作用,经过重组的H9N2病毒具有潜在的感染、致死哺乳动物的可能性,因此,必须对该型H9N2的防治引起广泛重视,加强对H9N2病毒变异演化的检测,防止造成新的禽流感亚型的爆发和流行,避免对公众健康和人民生命财产造成损失。
