| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 嫁接的产生及其发展 | 第11页 |
| 1.2 嫁接在农业生产中的应用 | 第11-12页 |
| 1.3 嫁接在植物长途信号转导研究中的重要作用 | 第12-13页 |
| 1.4 拟南芥幼苗微嫁接技术 | 第13-15页 |
| 1.5 嫁接体发育中接口融合过程的研究 | 第15-16页 |
| 1.5.1 对接口融合过程的研究 | 第15页 |
| 1.5.2 接口融合过程中接穗砧木细胞间遗传物质的转移 | 第15-16页 |
| 1.6 植物细胞间信号转导概述 | 第16-19页 |
| 第二章 实验方法与材料 | 第19-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-33页 |
| 2.2.1 拟南芥幼苗微嫁接 | 第19-20页 |
| 2.2.2 烟草幼苗微嫁接 | 第20-21页 |
| 2.2.3 番茄幼苗嫁接 | 第21-22页 |
| 2.2.4 苜蓿幼苗嫁接 | 第22页 |
| 2.2.5 PI染色(Pseudo-Schiff Propidium iodide staining,PS-PI staining) | 第22-23页 |
| 2.2.6 GUS(β-Glucuronidase)染色 | 第23页 |
| 2.2.7 酸性品红染色(acid fuchsin) | 第23-24页 |
| 2.2.8 显微镜的使用 | 第24页 |
| 2.2.9 载体构建 | 第24-25页 |
| 2.2.10 拟南芥转化 | 第25页 |
| 2.2.11 定量PCR(Real Time quantitative PCR) | 第25-26页 |
| 2.2.12 Trizol法提取RNA | 第26页 |
| 2.2.13 去除基因组DNA | 第26-27页 |
| 2.2.14 反转录 | 第27-28页 |
| 2.2.15 胶回收(AxyGEN胶回收试剂盒) | 第28页 |
| 2.2.16 碱裂解法提质粒 | 第28-29页 |
| 2.2.17 大肠杆菌感受态制备 | 第29页 |
| 2.2.18 大肠杆菌的转化 | 第29页 |
| 2.2.19 农杆菌感受态制备 | 第29-30页 |
| 2.2.20 农杆菌转化 | 第30页 |
| 2.2.21 树脂切片 | 第30页 |
| 2.2.22 酵母双杂交实验 | 第30-32页 |
| 2.2.23 烟草叶肉细胞的瞬时表达 | 第32-33页 |
| 2.3 芯片实验 | 第33-40页 |
| 2.3.1 总RNA的提取(TRIzol,Invitrogen) | 第33-34页 |
| 2.3.2 RNA质检以及纯化 | 第34页 |
| 2.3.3 合成双链cDNA | 第34-35页 |
| 2.3.4 cRNA合成以及纯化 | 第35-36页 |
| 2.3.5 cRNA浓度测定及质控 | 第36页 |
| 2.3.6 荧光标记cRNA及其纯化 | 第36-37页 |
| 2.3.7 芯片杂交 | 第37页 |
| 2.3.8 芯片洗涤 | 第37页 |
| 2.3.9 显色、扫描 | 第37页 |
| 2.3.10 数据分析 | 第37-38页 |
| 2.3.11 microRNA表达谱芯片实验 | 第38-40页 |
| 第三章 实验结果 | 第40-48页 |
| 3.1 拟南芥幼苗微嫁接技术的改进 | 第40页 |
| 3.2 改进后的技术在其它双子叶植物中的应用 | 第40-41页 |
| 3.3 拟南芥幼苗嫁接体接口融合过程的组织学分析 | 第41-42页 |
| 3.4 3dag时嫁接体维管组织运输功能的恢复 | 第42页 |
| 3.5 生长素响应植株DR5与WT嫁接检测生长素在接口融合过程中的功能 | 第42-43页 |
| 3.6 1dag WT/WT嫁接体的mRNA表达谱分析 | 第43-45页 |
| 3.7 1dag WT/WT嫁接体的microRNA表达谱分析 | 第45页 |
| 3.8 芯片差异表达基因的进一步分析 | 第45-47页 |
| 3.8.1 通过promoter-GUS转基因系分析基因与接口融合过程的相关性 | 第45-46页 |
| 3.8.2 突变体鉴定 | 第46页 |
| 3.8.3 蛋白的亚细胞定位 | 第46-47页 |
| 3.9 酵母双杂交实验检测CIPK14(AT5G01820)与AKT2(AT4G22200)的相互作用 | 第47-48页 |
| 第四章 结论 | 第48-55页 |
| 4.1 改进后的拟南芥幼苗微嫁接技术操作简便实用,嫁接体成活率高而且可以方便的进行研究过程中的取材 | 第48-49页 |
| 4.1.1 改进后的嫁接技术极大的提高了嫁接体的成活率 | 第48页 |
| 4.1.2 改进后的嫁接技术操作简便,实验步骤减少的同时可靠性得到了大幅度的提高 | 第48页 |
| 4.1.3 改进后的技术可以方便的进行嫁接体的取材,有利于后续研究的开展 | 第48-49页 |
| 4.2 改进后的幼苗微嫁接技术可以方便的直接应用于多种双子叶植物中 | 第49页 |
| 4.3 拟南芥幼苗嫁接体嫁接后三天维管组织已经恢复运输功能 | 第49-50页 |
| 4.4 生长素诱导接口部位的细胞分裂和分化,促进接穗和砧木中维管组织的分化,为接穗砧木中维管组织的连接中“定向”,指示两部分维管组织相互连通 | 第50-51页 |
| 4.4.1 由图8B-C可知,DR5植株的GUS染色显示出接口部位附近在嫁接后第2-3天时有较为深重的着色,说明生长素在接口融合的过程中发挥重要作用 | 第50页 |
| 4.4.2 WT/DR5嫁接体GUS染色的情况进一步的显示出生长素在接穗和砧木维管组织连接的过程中重要的“定向”作用 | 第50-51页 |
| 4.5 芯片数据的分析结果显示,在1dag,接穗和砧木细胞之间正在进行细胞间的信号传递。这一过程伴随着细胞生长被抑制以及接口部位的细胞对损伤造成的细胞碎片进行清理的过程。同时,这几个发育过程均是由损伤诱导的一套基因程序来调控的 | 第51-53页 |
| 4.5.1 嫁接后第一天,接穗和砧木细胞之间正在进行细胞间通讯,彼此交换信号,以重建细胞间的通讯网络 | 第51-52页 |
| 4.5.2 接穗和砧木之间的细胞间通讯过程伴随着接口附近完整细胞对细胞碎片的清除以及细胞生长被抑制的过程 | 第52-53页 |
| 4.5.3 细胞间通讯过程,细胞碎片的清理以及细胞生长受到抑制,这三个过程都是由损伤诱导的一套基因表达程序来调控的 | 第53页 |
| 4.6 嫁接体接口融合过程的发育模型 | 第53-55页 |
| 第五章 讨论 | 第55-66页 |
| 5.1 改进后的幼苗微嫁接技术可以作为一个方便可靠的研究平台应用于植物学研究的多个方面 | 第55-61页 |
| 5.1.1 幼苗微嫁接技术可以促进植物长途信号转导的研究 | 第55-56页 |
| 5.1.2 幼苗微嫁接技术与接口融合过程的研究 | 第56-57页 |
| 5.1.3 幼苗微嫁接技术与接口融合过程中遗传物质的转移 | 第57-59页 |
| 5.1.4 幼苗微嫁接技术与表观遗传学研究 | 第59-61页 |
| 5.2 接口融合过程中激素的作用 | 第61-62页 |
| 5.2.1 拟南芥嫁接体接口融合过程中主要作用的激素为乙烯(ethylene)以及茉莉酸(jasmonic acid) | 第61页 |
| 5.2.2 Ethylene及JA在接穗和砧木细胞间信号传递过程中的作用 | 第61-62页 |
| 5.2.3 生长素在接口融合过程中的作用 | 第62页 |
| 5.3 接穗和砧木之间传递信号的可能的机制 | 第62-65页 |
| 5.3.1 糖运输途径与细胞间通讯 | 第63-64页 |
| 5.3.2 寡糖(oligosaccharides)可能作为信号分子在接穗砧木细胞间传递 | 第64页 |
| 5.3.3 胞间连丝在接穗砧木细胞间通讯过程中的作用 | 第64-65页 |
| 5.4 接口融合过程中microRNA的作用 | 第65页 |
| 5.5 接口融合过程中细胞间通讯过程突变体的鉴定 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 表格 | 第75-92页 |
| 附表 | 第92-110页 |
| 图版 | 第110-132页 |
| 研究成果 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
