研究目的:1、探索脐带间充质干细胞(UC-MSCs)培养的最佳密度,研究其生物学特性及表型特征。2、研究脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的作用及其可能的机制。研究方法:1、复苏第3代(passage3, P3)脐带间充质干细胞(UC-MSCs),于含10%胎牛血清的DMEM/F12中培养,传代至P7,将P3和P7进行表型鉴定,比较两者间差别,取第7代进行共培养实验。2、计数脐带间充质干细胞(UC-MSCs),分别以8×106/孔、4×106/孔、2×106/孔、1×106/孔、5×105/孔、2.5×105/孔进行培养,观察比较细胞生长情况,取相应适合密度进行共培养实验。3、消化收集脐带间充质干细胞(UC-MSCs),分别取4×106/孔、2×106/孔、1×106/孔、5×105/孔、2.5×105/孔种于六孔板,24h后于上层Transwell膜种1×106/孔肝癌HepG2细胞,共培养24h、48h、72h后Tunell法检测肝癌HepG2细胞凋亡,流式细胞仪检测肝癌HepG2细胞内蛋白AFP、Bcl2、Survivin的表达,另分别取1.5×106/孔、1.25×106/孔、1×106/孔、7.5×105/孔、5×105/孔种于六孔板,24h后于上层Transwell膜种,5×105/孔肝癌HepG2细胞,共培养24h、48h、72h后MTT检测细胞增殖。4、消化收集脐带间充质干细胞(UC-MSCs),取1.5×106/孔、1.25×106/孔、1×106/孔、7.5×105/孔、5×105/孔种于六孔板,24h后于上层Transwell膜种,5×105/孔肝癌HepG2细胞,共培养72h后RT-PCR检测AFP、Bcl2、Survivn基因表达。结果:1、脐带间充质干细胞(UC-MSCs)经冻存后复苏,细胞呈平行排列或漩涡状生长,形态均一。2、P3及P7细胞免疫表型显示表达间充质干细胞标记CD29. CD44、 CD90、 CD105,不表达造血干细胞表面标记CD34、 CD45。3、不同密度的脐带间充质干细胞(UC-MSCs)培养及结果显示:8×106/孔、4×106/孔细胞24h即完全长满,且细胞可见贴壁细胞密度较大,不能完全伸展,而8×106/孔可见大量细胞不能贴壁。2×106/孔、1×106/孔、5×]05/孔、2.5×105/孔细胞24h即贴壁完全,且完全伸展,状态良好,但尚未长满6孔板,72h后8×106/孔、4×106/孔、2×106/孔细胞可完全长满6孔板,除见8×106/孔未贴壁细胞死亡,其余密度孔细胞未见细胞死亡,所有细胞随培养时间的增加体积增大,细胞排列逐渐有序。4、共培养后HepG2细胞凋亡率随脐带间充质干细胞(UC-MSCs)密度的增加而增加,差异有统计学意义(P<0.01),随UC-MSCs作用时间的延长而增加,差异有统计学意义(P<0.01),72h凋亡率达53.4%。5、共培养后肝癌HepG2细胞内蛋白AFP、 Bc12、 Survivn的阳性表达率随脐带间充质干细胞(UC-MSCs)密度的增加而降低,差异有统计学意义(P<0.01),随时间的延长而降低,除对照组差异无统计学意义外(P>0.05),其余各个密度组差异均有统计学意义(P<0.01)。6、共培养后HepG2细胞增殖抑制率随UC-MSCs作用密度增加而增加,随作用时间延长而增加,差异有统计学意义(P<0.01)。7、共培养后HepG2细胞内AFP、 Bcl2、 Survivn基因表达随UC-MSCs作用密度增加而增加而减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:脐带间充质干细胞(UC-MSCs)与肝癌HepG2细胞共培养后可促进肝癌HepG2细胞凋亡,抑制HepG2细胞增殖,该作用与肝癌HepG2细胞内凋亡蛋白AFP、 Bc12、 Survivn目关。