中文摘要 | 第3-4页 |
ABSTRACT | 第4-5页 |
前言 | 第11-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-37页 |
1.1 交联酶聚体技术研究现状 | 第14-21页 |
1.1.1 基本技术及影响因素 | 第14-16页 |
1.1.2 新型交联酶聚体研究进展 | 第16-20页 |
1.1.3 交联酶聚体在生物催化转化中的应用 | 第20-21页 |
1.2 蛋白组学研究概述 | 第21-25页 |
1.2.1 蛋白组学研究策略与分析手段 | 第21-23页 |
1.2.2 辅助蛋白酶解技术 | 第23-24页 |
1.2.3 固定化酶技术在蛋白组学研究中的应用 | 第24-25页 |
1.3 酶法合成β-内酰胺类抗生素研究进展 | 第25-28页 |
1.3.1 β-内酰胺类抗生素简介 | 第25-27页 |
1.3.2 β-内酰胺类抗生素的化学法合成 | 第27页 |
1.3.3 β-内酰胺类抗生素的酶法合成 | 第27页 |
1.3.4 非传统体系中酶法合成β-内酰胺类抗生素 | 第27-28页 |
1.4 酶法降解壳聚糖制备低分子量壳聚糖研究进展 | 第28-33页 |
1.4.1 壳聚糖的结构及用途 | 第28-30页 |
1.4.2 低聚壳聚糖的性质和生产方法 | 第30-32页 |
1.4.3 低聚壳聚糖的生物活性 | 第32-33页 |
1.5 本文主要研究内容 | 第33-37页 |
第二章 胰蛋白酶CLEAs 的制备工艺与催化性质 | 第37-46页 |
2.1 引言 | 第37页 |
2.2 实验材料和方法 | 第37-39页 |
2.2.1 试剂和材料 | 第37-38页 |
2.2.2 胰蛋白酶CLEAs 的制备 | 第38页 |
2.2.3 胰蛋白酶活性测定 | 第38页 |
2.2.4 胰蛋白酶CLEAs 的稳定性 | 第38页 |
2.2.5 胰蛋白酶CLEAs 的形貌表征 | 第38-39页 |
2.3 结果和讨论 | 第39-44页 |
2.3.1 胰蛋白酶CLEAs 制备工艺优化 | 第39-40页 |
2.3.2 胰蛋白酶CLEAs 的应用性质 | 第40-41页 |
2.3.3 胰蛋白酶CLEAs 的稳定性 | 第41-43页 |
2.3.4 胰蛋白酶CLEAs 的微观结构 | 第43-44页 |
2.4 本章 小结 | 第44-46页 |
第三章 胰蛋白酶CLEAs 在蛋白组学分析中的应用 | 第46-60页 |
3.1 引言 | 第46-47页 |
3.2 实验材料和方法 | 第47-48页 |
3.2.1 试剂和材料 | 第47页 |
3.2.2 胰蛋白酶CLEAs 的制备 | 第47页 |
3.2.3 蛋白溶液酶解 | 第47页 |
3.2.4 高温辅助胰蛋白酶CLEAs 酶解 | 第47页 |
3.2.5 超声辅助胰蛋白酶CLEAs 酶解 | 第47-48页 |
3.2.6 MALDI-TOF 样品制备 | 第48页 |
3.2.7 酶解多肽的数据库搜索 | 第48页 |
3.3 结果和讨论 | 第48-58页 |
3.3.1 游离胰蛋白酶及CLEAs 的自水解 | 第48-49页 |
3.3.2 高酶浓度下蛋白酶解 | 第49-50页 |
3.3.3 胰蛋白酶CLEAs 高温辅助酶解 | 第50-55页 |
3.3.4 胰蛋白酶CLEAs 超声辅助酶解 | 第55-58页 |
3.4 本章 小结 | 第58-60页 |
第四章 糖类添加剂对青霉素酰化酶CLEAs 的活性改善研究 | 第60-71页 |
4.1 引言 | 第60-61页 |
4.2 实验材料和方法 | 第61-62页 |
4.2.1 试剂和材料 | 第61页 |
4.2.2 青霉素酰化酶的纯化 | 第61页 |
4.2.3 青霉素酰化酶CLEAs 的制备 | 第61页 |
4.2.4 青霉素酰化酶水解活性(U_h)的测定 | 第61-62页 |
4.2.5 热稳定性 | 第62页 |
4.2.6 储存稳定性 | 第62页 |
4.3 结果与讨论 | 第62-69页 |
4.3.1 青霉素酰化酶的纯化结果 | 第62-64页 |
4.3.2 有机沉淀剂对CLEAs 酶活收率的影响 | 第64-66页 |
4.3.3 糖类添加剂对CLEAs 酶活改善的作用 | 第66-68页 |
4.3.4 糖类添加剂对CLEAs 热稳定性的影响 | 第68-69页 |
4.3.5 糖类添加剂对CLEAs 储存稳定性的影响 | 第69页 |
4.4 本章 小结 | 第69-71页 |
第五章 糖类改善青霉素酰化酶CLEAs 活性的表征和机理研究 | 第71-82页 |
5.1 引言 | 第71-72页 |
5.2 实验材料和方法 | 第72-73页 |
5.2.1 试剂和材料 | 第72页 |
5.2.2 CLEAs 微观形貌的扫描电子显微镜(SEM)表征 | 第72页 |
5.2.3 CLEAs 微环境的激光共聚焦显微镜(CLSM)表征 | 第72页 |
5.2.4 青霉素酰化酶二级结构的傅里叶红外光谱(FTIR)表征 | 第72-73页 |
5.2.5 催化青霉素水解反应的动力学参数测定 | 第73页 |
5.3 结果和讨论 | 第73-80页 |
5.3.1 添加海藻糖对CLEAs 微观形貌的影响 | 第73-74页 |
5.3.2 添加海藻糖对CLEAs 微环境的影响 | 第74-76页 |
5.3.3 添加海藻糖对青霉素酰化酶二级结构的影响 | 第76-78页 |
5.3.4 CLEAs 催化青霉素水解反应的动力学参数 | 第78-80页 |
5.4 本章 小结 | 第80-82页 |
第六章 糖类改善青霉素酰化酶CLEAs 在合成阿莫西林中的应用 | 第82-91页 |
6.1 引言 | 第82-83页 |
6.2 实验材料和方法 | 第83-84页 |
6.2.1 试剂和材料 | 第83页 |
6.2.2 青霉素酰化酶合成活性(Us)测定 | 第83-84页 |
6.2.3 阿莫西林的酶法合成 | 第84页 |
6.2.4 阿莫西林合成反应体系各组分含量分析 | 第84页 |
6.3 结果和讨论 | 第84-89页 |
6.3.1 沉淀剂种类对青霉素酰化酶CLEAs 合成酶活和选择性的影响 | 第84-85页 |
6.3.2 糖类添加剂对青霉素酰化酶CLEAs 合成活性和选择性的影响 | 第85-86页 |
6.3.3 有机介质体系中酶法合成阿莫西林 | 第86-88页 |
6.3.4 底物比例对阿莫西林合成反应的影响 | 第88-89页 |
6.4 本章 小结 | 第89-91页 |
第七章 多孔化木瓜蛋白酶CLEAs 的制备 | 第91-99页 |
7.1 引言 | 第91-92页 |
7.2 实验材料和方法 | 第92-94页 |
7.2.1 试剂和材料 | 第92页 |
7.2.2 木瓜蛋白酶CLEAs 及p-CLEAs 的制备 | 第92-93页 |
7.2.3 木瓜蛋白酶活性检测 | 第93页 |
7.2.4 木瓜蛋白酶催化大分子反应效率的测定 | 第93页 |
7.2.5 大分子蛋白底物分子尺寸的测定 | 第93-94页 |
7.3 结果和讨论 | 第94-98页 |
7.3.1 多孔化木瓜蛋白酶CLEAs 的制备流程 | 第94-95页 |
7.3.2 多孔化木瓜蛋白酶CLEAs 的形貌 | 第95页 |
7.3.3 多孔化木瓜蛋白酶CLEAs 的催化效率 | 第95-97页 |
7.3.4 致孔剂浓度对多孔化木瓜蛋白酶p-CLEAs 催化效率的影响 | 第97-98页 |
7.4 本章 小结 | 第98-99页 |
第八章 多孔化木瓜蛋白酶CLEAs 在水解壳聚糖制备低聚糖中的应用 | 第99-111页 |
8.1 引言 | 第99-100页 |
8.2 实验材料和方法 | 第100-102页 |
8.2.1 试剂和材料 | 第100页 |
8.2.2 木瓜蛋白酶p-CLEAs 的制备 | 第100页 |
8.2.3 木瓜蛋白酶降解壳聚糖 | 第100页 |
8.2.4 木瓜蛋白酶催化降解壳聚糖效率的测定 | 第100-101页 |
8.2.5 壳聚糖及其酶解产物的相对分子质量分布 | 第101页 |
8.2.6 壳聚糖分子尺寸的测定 | 第101页 |
8.2.7 壳聚糖水解产物的超滤膜分离 | 第101页 |
8.2.8 壳聚糖水解产物抗菌性测定 | 第101-102页 |
8.3 结果和讨论 | 第102-110页 |
8.3.1 游离木瓜蛋白酶,CLEAs,p-CLEAs 降解壳聚糖效率对比 | 第102-103页 |
8.3.2 木瓜蛋白酶p-CLEAs 降解不同分子量壳聚糖底物对比 | 第103-104页 |
8.3.3 木瓜蛋白酶p-CLEAs 水解壳聚糖过程分子量及多分散度变化 | 第104-108页 |
8.3.4 木瓜蛋白酶p-CLEAs 降解壳聚糖的重复利用性 | 第108-109页 |
8.3.5 壳聚糖水解产物的抗菌性能 | 第109-110页 |
8.4 本章 小结 | 第110-111页 |
第九章 结论与展望 | 第111-116页 |
9.1 结论 | 第111-113页 |
9.1.1 CLEAs 的制备工艺及技术改进 | 第111-112页 |
9.1.2 CLEAs 及改进技术在蛋白组学与生物催化中的应用 | 第112-113页 |
9.2 本文主要创新点 | 第113页 |
9.3 展望 | 第113-116页 |
参考文献 | 第116-135页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第135-137页 |
附录一: HPLC 测定阿莫西林合成体系中各组分色谱保留时间及浓度标准曲线 | 第137-138页 |
附录二: 壳聚糖降解产物还原糖含量标准曲线 | 第138页 |
附录三: PEG/PEO 标准品的凝胶排阻色谱曲线 | 第138-139页 |
致谢 | 第139页 |