SAHA对TGF-β诱导人胚肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响

目的探讨在转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激下，组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对人胚肺成纤维细胞系HELF向肌成纤维细胞(MF)分化的影响，从而为其用于治疗IPF提供理论依据。方法实验分为对照组，TGF-β1组（5ng/mL）和不同浓度SAHA处理组（0.5，2，5μM）。体外培养HELF细胞，用5ng/mL TGF-β1和5μM SAHA共同刺激24h，观察处理前后细胞形态学变化情况，以探讨SAHA对HELF向肌成纤维细胞（MF）转分化过程的影响； HELF细胞先用TGF-β1刺激24h，随后加入0.5，2，5μM SAHA共孵育24h，MTT法检测细胞的增殖情况，Western blot检测α-SMA表达，比色法测量羟脯氨酸的含量，天狼猩红染色分析总胶原含量，以及RT-PCR检测I、III型前胶原的mRNA表达水平。结果1.正常对照组的细胞呈长梭形，呈一定的弧形生长，胞核较大，成卵圆形且多居中。经TGF-β1作用后，细胞密度明显增加，呈漩涡状、放射性生长。当HELF细胞经5μM SAHA共同孵育后，细胞间隔增宽，突起缩短，细胞质减少。2.HELF细胞经TGF-β1作用后，其增殖活性显著增高。当给予5μM SAHA处理后，细胞增殖率减少了29.5%，与TGF-β1组相比，差异具有统计学意义。3.对照组羟脯氨酸表达极低，TGF-β1处理后，羟脯氨酸含量显著增高。当用0.5，2，5μM SAHA处理后，羟脯氨酸含量随着SAHA浓度的增加而减少。4.对照组中几乎无α-SMA蛋白表达，TGF-β1处理后α-SMA水平显著增高，而SAHA能有效降低α-SMA的水平。5.TGF-β1组（B组）总胶原含量显著高于对照组。0.5，2，5μM SAHA处理后，胶原含量随剂量的增加而减少。6.SAHA孵育24h后，能够明显抑制TGF-β1刺激后的细胞表达I型和III型前胶原蛋白mRNA，并且具有明显的剂量依赖性。结论SAHA能抑制TGF-β1诱导HELF细胞向MF的分化和增殖，主要表现为生长抑制、α-SMA表达降低以及前胶原蛋白表达减少。