本课题的前期研究发现火麻仁中木脂素酰胺类成分具有较强的体外清除自由基活性。在此基础上,本文首次采用Box-Behnken响应面分析法,以总木脂素酰胺类及大麻酰胺A为指标,优化出火麻仁木脂素酰胺类的乙醇回流提取工艺条件：乙醇浓度70.20%,料液比为1：7.725,温度为82.72℃,按此工艺参数提取,总木脂素酰胺的含量为1.912%。在大工业生产中可将乙醇浓度设为65%,其他条件不变,此条件下,总木脂素酰胺的含量为1.910%。为了进一步纯化木脂素酰胺类化合物,选用了4种不同型号的大孔树脂比较,通过树脂的静态吸附量、吸附动力学性能、动态吸附性能和动态解吸率性能试验,确定D-101型为分离木脂素酰胺类成分的最佳树脂,并对其载样量、洗脱溶剂等参数进行考察,得出火麻仁木脂素酰胺类成分的分离工艺为：上样液(浓度为3.978mg/mL)调至PH值为3.98,温度为55℃,加至已预处理的D-101树脂(吸附柱径高比为1：7,流速1BV／h)吸附0.5h,用3BV的蒸馏水洗至基本无色,再用20%乙醇3BV洗脱,弃去洗脱液,用60%乙醇3BV洗脱(流速1BV／h),收集洗脱液,减压浓缩、干燥。本文进一步对火麻仁及其木脂素酰胺类的精提物建立了薄层色谱鉴别方法,并以大麻酰胺A(cannabisin A)为含量检测指标,采用C18柱,乙腈-0.1%磷酸水溶液(22：78)为流动相,255nm为检测波长,建立了火麻仁及其木脂素酰胺类中大麻酰胺A含量测定方法,并进行了方法学考察,结果表明分析方法的重复性、仪器精密度、回收率等指标符合定量分析要求,可用于工艺、质量及稳定性研究。为了探索火麻仁木脂素酰胺类的抗氧化及保肝活性,本文首次以1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH)、超氧阴离子自由基(O2-)、羟自由基(OH)三种不同自由基体系研究火麻仁木脂素酰胺类的粗提物、精提物及cannabisin A的活性清除作用。结果表明在一定的剂量范围内,三者均有显著的活性清除作用,且与剂量呈明显量效关系,其中精提物的清除作用最强。在体外抗氧化活性评价的基础上,建立CCl4诱导的急性肝损伤模型,考察火麻仁木脂素酰胺类体内抗氧化及保肝活性。实验结果表明,木脂素酰胺类化合物具有显著降低谷草转氨酶(ALT)、谷丙转氨酶(AST)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平,并能提升超氧化物歧化酶(SOD)的活性。这些生化指标提示火麻仁木脂素酰胺类可能通过提升机体抗氧化酶类活性,降低体内自由基水平,有效地减少自由基引发的肝细胞损伤,从而起到保肝的作用。
