香石竹再生体系的建立及根癌农杆菌介导的遗传转化体系的研究

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香石竹(Dianthus caryophyllus L)是世界四大切花之一,在花卉市场中占有重要地位。香石竹的育种目标除观赏性状之外,还有园艺性状,我国目前以链格孢属(altemaria)引起的叶斑病比较普遍且严重,抗病育种已成为香石竹育种的重要目标。另外,耐热性、丰产性也是香石竹育种研究中的重要目标。因此,运用转基因技术,导入目的基因,解决育种中的问题,使香石竹获得目标性状便具有十分重要的意义。本实验以建立的香石竹高频再生体系为基础,利用GUS染色组织分析法,研究了影响根癌农杆菌(A.tumefaciens)LBA4404菌株介导的香石竹遗传转化的若干因素,建立了香石竹快速有效的遗传转化体系。香石竹的分化培养基、附加乙酰丁香酮与否、预培养的时间、菌液浓度及浸染时间、共培养时间和卡那霉素浓度等对转化频率的影响。抗性植株经GUS检测表明,外源基因基本已整合进香石竹基因组中。香石竹再生体系的建立。确定以香石竹无菌苗叶片为外植体,从不同细胞分裂素及其他激素配合使用等方面进行选择筛选,建立香石竹叶片离体再生体系。结果表明,不同的细胞分裂素影响叶片不定芽分化频率,其中较低浓度的NAA(0.1 mg/L)和TDZ(1.0 mg/L)配合使用能有效诱导香石竹叶片不定芽分化。因此,香石竹叶片不定芽分化的适宜培养基为:MS+1.0mg/LTDZ+0.1mg/LNAA;壮苗培养基为:MS+0.5mg/LBA+0.05mg/LNAA。香石竹遗传转化体系的建立。用根癌农杆菌(A.tumefaciens)LBA4404菌株,介导香石竹的遗传转化,进行比较试验得出:预培养基为MS+1.0mg/LTDZ+0.1mg/LNAA,预培养2d;共培养基为MS+0.1mg/LNAA+1.0mg/LTDZ+100μmol/LAS,暗培养3d;选择分化培养基MS+0.1mg/LNAA+1.0mg/LTDZ+60mg/LKm+400mg/LCef中筛选培养;再生的抗性苗的生根筛选培养基为1/2MS+0.1mg/LNAA+25mg/LKm。转基因植株的筛选。再生苗在生根筛选培养基上培养,能获得10.7%的生根率。
摘要第4-5页
Abstract第5页
第一章 文献综述第6-16页
    1.1 香石竹概述第6页
    1.2 关于基因工程第6-11页
    1.3 花卉基因工程研究进展及现状第11-13页
    1.4 香石竹基因工程研究进展第13-16页
第二章 前言第16-18页
第三章 材料与方法第18-25页
    3.1 试验材料第18-20页
    3.2 实验方法第20-25页
第四章 结果与分析第25-37页
    4.1 香石竹再生体系的建立第25-29页
    4.2 遗传转化体系的建立第29-35页
    4.3 转化植株的检测第35-37页
第五章 讨论第37-41页
    5.1 转化材料的确定第37页
    5.2 激素的选用第37-38页
    5.3 基因转化中遇到的玻璃化和畸形苗问题第38-39页
    5.4 转化条件的影响第39-41页
第六章 结论第41-42页
参考文献第42-48页
致谢第48页
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