菌丝霉素是从腐生子囊菌(Pseudoplectania nigrella)的分泌蛋白中分离出来的首例真菌防御素。菌丝霉素的成熟功能片段只有40个氨基酸,其分子量约为4.4KDa,其空间结构为防御素典型的CSap基序。菌丝霉素对革兰氏阳性菌特别是肺炎链球菌有很强的杀菌作用,且由于其独特的杀菌机制,使菌丝霉素不具细胞毒性和溶血性等危害,因此具有很大的药用潜力和大规模生产前途。本文主要研究了菌丝霉素在大肠杆菌中高效表达的方法以及探索金属螯合亲和色谱纯化菌丝霉素的最佳纯化条件。根据NCBI GenBank中菌丝霉素成熟肽的基因序列,人工合成菌丝霉素成熟肽的DNA片段并将其保存于pPIC-9K质粒中。再根据其基因序列人工设计合成一对特异引物,以保存于pPIC-9K质粒中的菌丝霉素基因片段为模板通过PCR技术克隆扩增目的基因片段,然后正向插入pET-32a(+)表达载体中,构建pET32a(+)-Plectasin表达重组质粒。经测序分析验证重组质粒中菌丝霉素基因序列的正确性后,将pET32a(+)-Plectasin重组质粒转入大肠杆菌Rosetta(DE3)表达菌株中,用IPTG作为诱导剂对融合基因进行诱导表达。SDS-PAGE蛋白质电泳结果显示,转化菌株表达了一条大约25 KDa的融合蛋白片段,与预期Trx-Plectasin融合蛋白的大小相符,其表达量约占菌体总蛋白的50%以上。破碎细胞,分离提取融合蛋白,用Ni-IMAC金属螯合亲和色谱纯化融合蛋白,经SDS-PAGE检测后可见一条纯净的大小约为25 KDa的洗脱条带,与预期的融合蛋白大小相符。用肠激酶切割融合标签,释放出菌丝霉素成熟肽段,并检测到重组菌丝霉素对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用。总之,本研究成功实现了菌丝霉素基因在原核表达系统中的高效表达,同时也摸索出提高金属螯合亲和色谱一次性纯化富含二硫键抗菌肽的纯化效率的条件,为富含二硫键的抗菌肽的基因工程生产提供参考。