表面粗糙开管毛细管电色谱柱的制备及在蛋白质分析中的应用

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采用原位聚合方法制备了一种表面粗糙型开管毛细管电色谱柱,具体方法为:以甲基丙烯酸酯为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)为交联剂,2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸(AMPS)提供正向电渗流,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,通过热引发聚合反应,在毛细管内壁形成均匀的多孔涂层,并可以通过致孔剂的种类和加入量控制表面的粗糙程度。实验结果表明在合成原料中加入致孔剂所制备的开管柱表面更粗糙,更适合蛋白质的分离分析。由于一元致孔剂比多元致孔剂更易形成均一的孔径结构,因此一元致孔剂比多元致孔剂所制备的开管柱分离效率更高,更有利于分离。甲基丙烯酸丁酯为功能单体时,采用正丙醇作为一元致孔剂得到的开管柱分离效果(R=2.02)最好,而甲基丙烯酸十二酯为功能单体时,采用正十二醇作为一元致孔剂得到的开管柱分离效果(R=2.00)最好,这是由于正丙醇,正十二醇的溶解度与各自的功能单体相近,易于致小孔,比表面积较大。另外,聚合温度越高,制备的涂层越稳定,孔径越小,而从分离效果看,分离蛋白质的最佳聚合温度为65℃。制备的两种表面粗糙型开管电色谱柱连续进样5次,保留时间的RSD%均小于1%,峰面积的RSD小于9%,不同批次开管电色谱柱的保留时间的RSD%(n=3)均小于3%,峰面积的RSD小于11%,说明本研究所采取的制备方法具有良好的稳定性和重复性。与聚乙烯吡咯烷酮动态涂覆的毛细管柱进行比较,尽管两者的分离效率相当,但本方法所制备的开管电色谱柱重复性略好,灵敏度则得到大大提高;与整体柱相比,分离时间大大缩短,结果表明这种新型开管毛细管电色谱柱在蛋白质快速分离分析中具有明显的优势
摘要第5-6页
Abstract第6页
第1章 绪论第9-23页
    1.1 蛋白质样品分离分析的意义第9页
    1.2 开管毛细管电色谱柱中的涂层技术第9-14页
        1.2.1 动态涂层技术第11-13页
        1.2.2 物理涂层技术第13-14页
        1.2.3 化学键合涂层技术第14页
    1.3 开管毛细管电色谱研究进展第14-21页
        1.3.1 表面粗糙化后键合固定相第16页
        1.3.2 溶胶-凝胶法第16-17页
        1.3.3 纳米粒子涂层开管毛细管电色谱第17-18页
        1.3.4 聚合物涂层开管毛细管电色谱柱第18-19页
        1.3.5 多孔聚合物涂层开管毛细管电色谱柱第19-21页
    1.4 表面多孔固定相的特点第21页
    1.5 本文研究内容第21-23页
第2章 表面粗糙聚甲基丙烯酸丁酯开管电色谱柱的制备研究第23-34页
    2.1 引言第23-24页
    2.2 实验部分第24-25页
        2.2.1 仪器与试剂第24页
        2.2.2 样品制备第24页
        2.2.3 涂层表面状态的表征第24-25页
        2.2.4 表面粗糙型开管电色谱柱的制备第25页
        2.2.5 电色谱条件第25页
    2.3 结果与讨论第25-33页
        2.3.1 涂层前后电渗流特征比较第25-26页
        2.3.2 致孔剂对分离的影响第26-31页
        2.3.3 柱子的稳定性和重复性第31-33页
    2.4 本章小结第33-34页
第3章 表面粗糙聚十二烷基甲基丙烯酸酯开管毛细管电色谱柱的制备研究第34-46页
    3.1 引言第34页
    3.2 实验部分第34-36页
        3.2.1 仪器与试剂第34-35页
        3.2.2 样品制备第35页
        3.2.3 粗糙型开管电色谱柱的制备第35-36页
        3.2.4 电色谱条件第36页
    3.3 结果与讨论第36-45页
        3.3.1 有机调节剂对分离的影响第36-38页
        3.3.2 聚合温度对分离的影响第38-39页
        3.3.3 致孔剂种类对分离的影响第39-42页
        3.3.4 柱子的稳定性和重复性研究第42-43页
        3.3.5 粗糙型开管电色谱柱在实际样品天麻分离中的应用第43-45页
        3.3.6 粗糙型开管电色谱柱在分离蛋白质酶解产物中的应用第45页
    3.4 本章小结第45-46页
第4章 表面粗糙开管毛细管电色谱柱在蛋白质分析中的应用第46-54页
    4.1 引言第46页
    4.2 实验部分第46-47页
        4.2.1 仪器与试剂第46-47页
        4.2.2 样品制备第47页
        4.2.3 表面粗糙型开管电色谱柱的制备第47页
        4.2.4 聚甲基丙烯酸丁酯整体柱的制备第47页
    4.3 结果与讨论第47-53页
        4.3.1 开管电色谱柱与整体柱分离结果比较第47-48页
        4.3.2 开管毛细管电色谱与毛细管区带电泳的比较第48-49页
        4.3.3 开管电色谱柱与动态涂层柱的比较第49-51页
        4.3.4 C_4和C_(12)分离蛋白质的比较第51-53页
    4.4 本章小结第53-54页
第5章 总结第54-55页
参考文献第55-62页
致谢第62-63页
已发表论文第63页
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