目的：通过观察艾灸对Hp胃炎大鼠胃黏膜损伤指数、胃黏膜HE染色镜检炎症程度评分、eHSP72、TLR2、4受体及受体后下游信号物质的影响,探讨艾灸保护胃粘膜及与eHSP72和TLR2、4免疫信号转导途径各环节之间的相关性,阐明了艾灸保护胃黏膜损伤的免疫学机制,为艾灸预防胃炎和艾灸的“治未病”理论提供试验依据。方法：本研究分为三个部分。第一部分：60只健康SD大鼠随机分为6组,即A。碳酸氢钠+消炎痛组、A空白组、B模型组、C艾灸组(模型+艾灸穴位组)、D艾灸非穴点组(模型+艾灸非穴点组)和E电针组(模型+电针穴位组),每组10只。采用Hp灌胃建立大鼠Hp胃炎模型,观察胃黏膜损伤指数、Hp快速尿素酶试验、胃黏膜涂片革兰氏染色检查、胃黏膜HE染色镜检炎症程度评分。第二部分：50只健康SD大鼠随机分为5组,即A空白组、B模型组、C艾灸组(模型+艾灸穴位组)、D艾灸非穴点组(模型+艾灸非穴点组)和E电针组(模型+电针穴位组),每组10只。取大鼠血清和胃组织,酶联免疫法检测大鼠血清Hp IgG和eHSP72含量,酶联免疫法检测胃组织匀浆液TNF-α、IL-1β、IL-10、IL-12含量。第三部分：动物分组及处理方法同第二部分。取外周血单核细胞,用实时定量PCR法检测外周血单核细胞TLR2mRNA. TLR4mRNA、CD14mRNA、MyD88mRNA的含量,蛋白免疫印记(Western Bolt)法检测外周血单核细胞NFκB、IκBα的含量。结果：1、与A组比较,B组Hp胃炎模型大鼠胃黏膜UI增加,快速尿素酶试验显示呈阳性，胃黏膜涂片革兰氏染色检查检测出Hp，胃黏膜组织HE染色镜检炎症程度评分积分值增高,说明造模成功；与B组比较,C组和E组大鼠胃黏膜UI和胃黏膜组织HE染色镜检炎症程度积分值减低,D组大鼠胃黏膜UI和胃黏膜组织HE染色镜检炎症程度积分值无明显减低；与E组相比,C组大鼠胃黏膜UI值无明显降低(P>0.05)。2、与A组比较,B组大鼠血清Hp IgG、eHSP72含量明显升高；与B组相比,C组大鼠Hp IgG含量降低,eHSP72含量升高；与D组相比,C组大鼠Hp IgG含量降低,eHSP72含量升高；与E组比较,C组大鼠Hp IgG含量降低,eHSP72含量无明显升高(P>0.05)。3、与A组比较,B组大鼠胃组织匀浆液TNF-α.IL-1β和IL-12含量升高(P<0.05或P<0.01),胃组织匀浆液IL-10含量降低(P<0.01)；与B组相比,C组大鼠组织匀浆液TNF-α.IL-1β和IL-12含量降低(P<0.01),胃组织匀浆液IL-10含量升高(P<0.01)；与D、E组相比,C组大鼠组织液TNF-α、IL-1β和IL-12含量降低(P<0.05或P<0.01),胃组织匀浆液IL-10含量升高(P<0.01)。4、与A组比较,B组Hp胃炎大鼠单核细胞TLR2、4mRNA含量增加(P<0.01),CD14mRNA、MyD88mRNA、NFκB含量也增加(P<0.01),IκBα含量降低(P<0.05)；与B组比较,C组大鼠单核细胞TLR2、4mRNA含量降低,CD14mRNA、MyD88mRNA、 NFκB含量也降低(P<0.01),IκBα含量升高(P<0.05)；与D、E组比较,C组大鼠单核细胞TLR2、4mRNA含量降低,CD14mRNA、MyD88mRNA、NFκB含量也降低(P<0.01),IκBα含量升高(P<0.05)。结论：1、Hp灌胃造模后可使胃粘膜UI显著增高,胃黏膜组织HE染色镜检炎症程度积分值增高,快速尿素酶试验显示呈阳性,胃黏膜涂片革兰氏染色检查检测出Hp,说明造模成功。2、艾灸预处理能显著降低Hp胃炎大鼠胃黏膜损伤指数,降低胃黏膜HE染色镜检炎症程度积分,提示艾灸预处理可减轻Hp胃炎大鼠胃黏膜损伤。3、艾灸预处理能显著增加血清eHSP72含量,降低血清Hp IgG含量,提示艾灸可通过诱导eHSP72的大量表达,启动和调控机体免疫系统对入侵的病原刺激物Hp清除,从而减少Hp IgG的生成。4、艾灸预处理能显著增加抑炎细胞因子IL-10的含量,降低促炎症细胞因子TNF-α,IL-1β和IL-12的含量,提示艾灸可通过调节抑炎细胞因子和促炎症细胞因子的释放,来干预Hp胃黏膜炎性损伤过程。5、艾灸预处理能降低外周血单核细胞TLR2、4mRNA、CD14mRNA、MyD88mRNA含量,增加IκBα表达,降低NFκB含量,提示艾灸可通过降低CD14mRNA和TLR2、4mRNA的表达,来调节TLR下游信号转导物质MyD88mRNA含量,增加IκBα表达,抑制NFκB活化,减轻炎症细胞因子的释放。6、鉴于eHSP72和Hp细胞壁的LPS是TLR受体的内外源配体,eHSP72是机体的免疫“应激信使”,艾灸预处理保护Hp胃黏膜损伤的机制可能与其诱导eHSP72的高表达,通过与TLR2、4受体结合启动受体后信号转导途径,调控下游信号物质的释放,调整机体相关免疫物质的释放,从而清除入侵Hp实现对胃黏膜的保护作用。7、艾灸和电针穴位组预处理均可降低胃黏膜UI,减轻胃黏膜损伤。相比之下,艾灸组在诱导eHSP72的表达,启动和调控TLR2、4受体及相关信号物质等方面优于电针组。
