微流控芯片电泳在食品分析中的应用研究

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微流控毛细管电泳技术的兴起引起了分析化学的革命。在几分钟甚至几秒钟内可以实现数百个样品的同时分离检测,具有分析速度快的优点。微流控芯片的试样消耗小,最少可到皮升。微流控芯片最大的特点在于可以集化学和生物等领域中涉及的样品制备、反应、分离、检测及细胞培养、分选、裂解等基本操作单元集成到一块几平方厘米的芯片上。这些特点使得微流控芯片具有广阔的发展前景。本论文的研究内容如下:1.利用微流控芯片电泳-激光诱导荧光建立了一种简单灵敏的用于检测牛奶中氨基酸的方法。经红敏荧光染料(Cy5)衍生后的七种氨基酸标样在150s内可以得到很好的分离检测。经反复考察得最佳微流控芯片电泳分离参数为:运行缓冲液为0.1mol/L硼砂-氢氧化钠溶液(pH=10.0),进样电压为0.8kv,分离电压为22kv。在0.02mol/L的硼砂溶液中,红敏荧光染料(Cy5)与氨基酸按1:1的计量比混合,黑暗处衍生6小时,得到荧光强度稳定的氨基酸衍生物。各氨基酸在1.0×10-xmol/L-1.0×10-6mol/L的浓度范围内呈现良好的线性关系,最低检测浓度为1.0×10-9mol/L.该方法简单、灵敏,用于牛奶中氨基酸的检测分析,结果准确可靠。2.建立了一种基于微流控芯片电泳-激光诱导荧光联用技术用于快速分离双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌和粪肠球菌的方法。在pH值为8.5的Tris硼砂EDTA-聚环氧乙烷缓冲液中四种益生菌在150S内被很好的分离。其中聚环氧乙烷能够大大降低微通道内壁对细菌的吸附。在pH为8.5的缓冲液中益生菌表面均带有负电荷,有助于电泳分离。此方法具有样品用量少、分析时间短、仪器设备简单、分析结果准确可靠等突出优点,可用于药物中益生菌的鉴定及分离。3.通过壳聚糖扫集、场放大样品堆积反转电场堆积多步浓缩方法联合,在微流控芯片上实现了细菌的高灵敏度检测。大肠杆菌被作为目标分析物来研究多步浓缩的效率。壳聚糖带正电荷且不会溶解细胞是一个比较合适的扫集试剂,通过添加一定量的牛磺酸改善了分析的灵敏度。浓缩方法的所有步骤和相应机理在文中被详细描述和讨论。与不施加浓缩步骤时相比,信号约增大了6600倍,大肠杆菌的检测限是145CFU/mL。该方法用于河水中大肠杆菌的检测,结果令人满意。与常规的细菌检测方法相比,该方法具有灵敏度高、样品消耗少和分析速度快等优点。
摘要第6-8页
ABSTRACT第8-9页
目录第11-14页
第一章 绪论第14-29页
    1 微流控芯片简介及发展史第14页
    2 微流控芯片的加工技术第14-19页
        2.1 微流控芯片的材料第14-15页
        2.2 光刻和蚀刻技术第15-16页
        2.3 玻璃微流控芯片的加工方法第16-17页
        2.4 高分子聚合物微流控芯片的加工方法第17-18页
        2.5 芯片钻孔第18页
        2.6 键合第18-19页
    3 芯片毛细管电泳第19-20页
        3.1 概述第19页
        3.2 进样方式第19-20页
    4 微流控芯片检测器第20-22页
        4.1 荧光检测器第20-21页
        4.2 化学发光检测器第21页
        4.3 电化学检测器第21页
        4.4 质谱检测器第21-22页
    5 微流控芯片的应用第22-24页
        5.1 概述第22页
        5.2 微流控芯片在氨基酸及蛋白质分析中的应用第22-24页
    6 微流控芯片的发展展望第24页
    7 本课题的研究意义及特色第24-25页
        7.1 研究意义第24页
        7.2 研究特色第24-25页
    参考文献第25-29页
第二章 微流控芯片电泳-激光诱导荧光用于快速检测牛奶中的氨基酸第29-40页
    1 引言第29-31页
    2 实验过程第31-33页
        2.1 试剂与仪器第31-32页
        2.2 玻璃微流控芯片的制作与结构第32页
        2.3 衍生过程第32-33页
        2.4 微流控芯片电泳分离氨基酸第33页
        2.5 牛奶处理过程第33页
    3 结果与讨论第33-37页
        3.1 氨基酸衍生条件的选择第33-34页
        3.2 缓冲液浓度与pH值对实验结果的影响第34页
        3.3 进样时间与分离电压的影响第34-35页
        3.4 方法验证第35-36页
        3.5 牛奶中氨基酸的定量分析第36-37页
    4 结论第37页
    参考文献第37-40页
第三章 微流控芯片电泳-激光诱导荧光用于快速分离四种益生菌第40-53页
    1 引言第40-41页
    2 实验部分第41-43页
        2.1 药品第41-42页
        2.2 溶液第42页
        2.3 衍生过程第42页
        2.4 仪器第42-43页
        2.5 微流控芯片电泳第43页
    3 结果与讨论第43-48页
        3.1 培养时间的选择第43-44页
        3.2 细菌悬浮液的制备第44-45页
        3.3 最佳电泳条件的选择第45-48页
            3.3.1 缓冲液中PEO浓度对实验结果的影响第45-46页
            3.3.2 缓冲液的pH值对实验结果的影响第46-47页
            3.3.3 药物分析第47-48页
    4 结论第48-49页
    参考文献第49-53页
第四章 场放大样品堆积与反向电场堆积联合实现微流控芯片细菌的超灵敏检测第53-69页
    1 引言第53-55页
    2 实验过程第55-58页
        2.1 试剂和仪器第55-56页
        2.2 玻璃微流控芯片的制作与结构第56页
        2.3 细菌悬浮液的制备第56-57页
        2.4 衍生过程第57页
        2.5 微流控芯片电泳第57页
        2.6 多步浓缩过程第57-58页
    3 结果和讨论第58-66页
        3.1 细菌进样方式和时间的研究第58-59页
        3.2 壳聚糖扫集和场放大样品堆积第59-60页
        3.3 反向电场堆积第60-61页
        3.4 缓冲溶液中牛磺酸的作用第61-62页
        3.5 壳聚糖浓度的研究第62-63页
        3.6 不同细菌的分析检测第63-64页
        3.7 多步浓缩方法的校正第64页
        3.8 地表水中E.coli的检测第64-66页
    4 结论第66页
    参考文献第66-69页
附录第69-71页
感谢第71页
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