不同倍性鲫鲤、鲫鲂与亲本之间染色体遗传关系的研究

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异源四倍体鲫鲤是世界上首例通过远缘杂交获得的两性可育并具有稳定遗传性状的鱼类群体。其产生过程为:红鲫(♀)(2n=100)和鲤鱼(♂)(2n=100)杂交得到杂交第一代(F1)(2n=100),F1小部分雌、雄可育,自交得到鲫鲤杂交第二代(F2)(2n=100),F2两年才能达到性成熟,由鲫鲤F2自交获得F3(2n=100),在F3中发现有两性可育的异源四倍体鲫鲤个体(4n=200)。所得的异源四倍体鲫鲤一年即可达到性成熟且雌、雄可育,分别能产生稳定的二倍体卵子和精子,延续四倍体后代。不同亚科间的红鲫(♀)与团头鲂(♂)(2n=48)杂交,在第一代中可获得不育的三倍体鲫鲂(3n=124)和可育四倍体鲫鲂(4n=148)。四倍体鲫鲂两年可达到性成熟,可以产生不减半的配子,通过自交延续后代,或与团头鲂(♂)回交产生五倍体(5n=172)后代。本研究以异源杂交鲫鲤、鲫鲂及其亲本为研究对象,通过对几种试验鱼的生产繁育、染色体制备、DNA含量测定、扩增5S rDNA等以及以一个重复序列单元(263bp)作为探针进行荧光原位杂交标记染色体实验,从染色体数目结构、序列同源性和FISH结果中分析,对异源杂交鲫鲤、鲫鲂染色体特征和来源进行了系统研究。获得的结果如下:1.通过制备肾脏染色体进行观察、计数、核型分析并结合DNA含量测定,可以确定试验鱼染色体数、倍性及染色体来源。2.对实验鱼5SrDNA序列和一个染色体着丝粒重复序列进行比较研究,杂交鱼中染色体着丝粒重复序列单元(263bp)与亲本序列的同源性在93%-98%之间,可知鲫鲤杂交鱼和鲫鲂杂交鱼稳定地继承有父本和母本的序列,且有一定比例的重组和变异发生。3.用红鲫的染色体着丝粒重复序列单元(263bp)作为红鲫特异性探针,进行荧光原位杂交,鲫鲤杂交鱼和鲫鲂杂交鱼的染色体组成中的红鲫染色体被全部标记出来,实验证明该方法可从分子细胞遗传学水平上精确地鉴定杂交鱼的染色体组成。
中文摘要第3-5页
ABSTRACT第5-6页
目录第7-9页
第一章 文献综述第9-24页
    1.1 多倍体物种的产生第9-15页
        1.1.1 多倍体鲫鲤的形成第10-11页
        1.1.2 多倍体鲫鲂的形成第11页
        1.1.3 鱼类的多倍化及倍性鉴定第11-15页
    1.2 鱼类的雌核发育和雄核发育第15-17页
        1.2.1 人工诱导雌核发育第15-17页
        1.2.2 雄核发育第17页
    1.3 荧光原位杂交第17-21页
        1.3.1 荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)原理第17-18页
        1.3.2 FISH的发展史第18页
        1.3.3 FISH技术的优点第18-19页
        1.3.4 多色 FISH第19页
        1.3.5 FISH探针第19-20页
        1.3.6 FISH的应用第20-21页
    1.4 基因组重复序列第21-24页
        1.4.1 重复序列的功能特征及进化意义第22页
        1.4.2 重复序列的获得第22-24页
第二章 杂交鱼的产生与染色体研究及倍性鉴定第24-30页
    2.1 实验材料和方法第24-26页
        2.1.1 实验材料第24-25页
        2.1.2 染色体的制备第25-26页
        2.1.3 DNA含量的测定第26页
    2.2 结果与分析第26-30页
        2.2.1 试验鱼肾细胞染色体数及倍性第26-28页
        2.2.2 流式细胞仪检测血细胞DNA含量第28-30页
第三章 染色体上两种重复序列的研究第30-37页
    3.1 材料与方法第30-33页
        3.1.1 实验材料第30页
        3.1.2 基因组DNA的提取第30-31页
        3.1.3 5SrDNA的PCR扩增、克隆及测序第31-32页
        3.1.4 263重复序列的PCR扩增、克隆及测序第32-33页
    3.2 结果与分析第33-37页
        3.2.1 5SrDNA相关序列克隆、测序结果分析第33页
        3.2.2 263特异性引物扩增结果第33-34页
        3.2.3 263特异性引物扩增序列测序结果分析第34-37页
第四章 利用荧光原位杂交分析多种杂交鱼与亲本的染色体遗传关系第37-48页
    4.1 材料与方法第37-41页
        4.1.1 研究对象第37-38页
        4.1.2 探针的制备(重复序列获得,探针的标记)第38-39页
        4.1.3 探针的纯化第39页
        4.1.4 荧光原位杂交过程第39-41页
    4.2 实验结果第41-48页
        4.2.1 红鲫263bp重复序列单元的dig-dUTP标记第41-42页
        4.2.2 红鲫特异性探针在红鲫、鲤鱼、F_1、F_(18)、G_1和三倍体鲫鲤中的定位第42-44页
        4.2.3 红鲫特异性探针在团头鲂、三倍体鲫鲂和四倍体鲫鲂中的定位第44-45页
        4.2.4 试验成功的一些因素第45-46页
        4.2.5 红鲫特异性探针在试验鱼染色体定位的探讨第46-47页
        4.2.6 染色体上信号特征的探讨第47-48页
第五章 总结与拓展第48-50页
参考文献第50-55页
附录第55-57页
攻读硕士学位期间发表的论文第57-58页
致谢第58-60页
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