PP2A介导MAP1B去磷酸化对BMSCs靶向脊髓损伤迁移的影响

微管相关蛋白1B（Microtubule associated proteins;MAP1B）的生物学活性受其磷酸化修饰调节，蛋白磷酸酶2A(Protein Phosphotase2A;PP2A)对MAP1B去磷酸化具有调控作用，但磷酸化修饰后MAP1B对骨髓间充质干细胞(Bonemsenchymal stem cells;BMSCs)靶向损伤脊髓迁移的作用及BMSCs内调控MAP1B磷酸化修饰的机制尚未见相关报道。本论文旨在验证BMSCs内PP2A介导的I型MAP1B磷酸化形式（Type I of phosphorylated MAP1B; P1-MAP1B）去磷酸化在脊髓缺血性损伤(Spinal Cord Ischemia Injury;SCII)后BMSCs靶向脊髓迁徙中的作用，及BMSCs内调控MAP1B磷酸化修饰分子机制。研究内容包括：1、兔BMSCs体外培养、鉴定。2、应用CM-Dil对BMSCs进行体外荧光标记和体内示踪。3、PP2A抑制剂OA和激动剂C2-ceramide预处理BMSCs；通过同位素32P标记蛋白底物法和Western-blot分别检测PP2A活性与I型MAP1B磷酸化形式P1-MAP1B含量。3、应用节段性腰动脉阻断术建立兔SCII模型，随机分为四组：IG组（抑制剂组）、AG组（激动剂组）、UG组（未治疗组）和CG组（对照组）；经耳缘静脉移植BMSCs后观察各组BMSCs活体内靶向脊髓迁移情况。4、应用磷酸化抑制剂LY294002与U0126分别阻断BMSCs内的PI3K和ERK1/2通路，Western-blot定量检测BMSCs内P1-MAP1B。结果显示：1、所收获BMSCs形态典型，具有间充质干细胞生长特性；2、CM-Dil荧光标记BMSCs后标记率达到99%以上；OA与C2-ceramide处理细胞后PP2A活性分别降低61%和增长78%（P<0.05），P1-MAP1B表达分别增高和降低（P<0.01），而MAP1B表达无明显变化（P>0.05）。干预效果可维持48h。OA与C2-ceramide预处理细胞后测得生长曲线较低平，BMSCs增殖略减缓（P<0.05）；3、成功建立兔脊髓缺血性损伤模型并移植BMSCs后，在激光共聚焦显微镜下观察可见：移植2天后，IG组和AG组在脊髓损伤部位均未发现荧光标记BMSCs聚集，UG组相应部位可见少量散在BMSCs；移植4天后IG组和AG组的脊髓损伤部位可见BMSCs聚集；4、与对照组相比较，抑制PI3K活性后MAP1B磷酸化水平升高；而抑制ERK1/2后MAP1B磷酸化水平降低（P<0.05）。研究表明：证明BMSCs内PP2A介导的MAP1B去磷酸化在调节BMSCs靶向脊髓损伤迁移过程中发挥重要作用。其中作用机制可能是MAP1B与P1-MAP1B维持动态平衡参与调节BMSCs靶向迁移，为MAP1B蛋白功能研究提供新的理论依据。目前尚无关于MAP1B与BMSCs靶向脊髓损伤迁移之间关系的报道。