海洋放线菌Y12-26次级代谢产物中活性组分的分离纯化、结构鉴定和生物活性的研究

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本文对海洋放线菌Y12-26的次级代谢产物中有抑菌活性的组分进行了分离纯化及结构鉴定,并对其生物活性进行研究。以对稻瘟病菌的生物活性为跟踪,通过溶剂萃取和浸取、硅胶柱层析、薄层层析、高效液相色谱制备等方法,对海洋放线菌Y12-26的发酵代谢产物中的活性组分进行了分离纯化,得到了三个抑菌活性化合物,暂时命名为Y12-26-Z-1、Y12-26-Z-2和Y12-26-Z-3,通过UV、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、2D NMR对其进行结构鉴定,经结构解析,确定化合物Y12-26-Z-1分子量为1042,为了确定其结构组成,还进行氨基酸组成分析,最终结合各相关数据,确定其分子式为C48H74N12O14;化合物Y12-26-Z-2分子量为550;化合物Y12-26-Z-3分子量为550。对化合物Y12-26-Z-1建立了可用于检测发酵和分离提取过程中其含量的HPLC分析方法。经离体生物活性测定,发现Y12-26-Z-1、Y12-26-Z-2和Y12-26-Z-3对Pyricularia oryzae的MIC分别为62.5μg/ml、20μg/ml和31μg/ml。在活体条件下对黄瓜白粉病菌和黄瓜灰霉病菌都具有较好的抑制活性。
摘要第4-5页
Abstract第5页
第一章 文献综述第10-28页
    1.1 农用抗生素的分类第11-12页
        1.1.1 农用抗虫抗生素第11页
        1.1.2 农用抗菌抗生素第11-12页
        1.1.3 除草及其他农用抗生素第12页
    1.2 海洋微生物产生的微生物新药第12-27页
        1.2.1 海洋放线菌产生的各类抗生素第13-18页
        1.2.2 海洋细菌产生的活性代谢产物第18-21页
        1.2.3 海洋真菌产生的活性代谢产物第21-24页
        1.2.4 海绵是发现新药的的的重要资源第24-25页
        1.2.5 国内研究进展第25-27页
    1.3 本课题研究背景与意义第27-28页
第二章 实验方法及流程第28-29页
第三章 海洋放线菌Y12-26发酵条件的优化第29-35页
    3.1 实验材料第29-30页
        3.1.1 实验仪器第29页
        3.1.2 实验试剂第29页
        3.1.3 实验菌种第29-30页
    3.2 实验过程第30-32页
        3.2.1 培养基的选择第30页
        3.2.2 发酵条件的选择第30页
        3.2.3 发酵培养第30页
        3.2.4 取样第30页
        3.2.5 离体生物活性测定第30-32页
    3.3 实验数据分析与讨论第32-33页
        3.3.1 不同发酵条件下对Po离体生测结果分析第32页
        3.3.2 不同发酵条件下对Sf的防治效果第32-33页
    3.4 洋放线菌Y12-26活性代谢产物的溶解性的研究第33-35页
        3.4.1 实验过程第33页
        3.4.2 结果讨论第33-35页
第四章 海洋放线菌Y12-26活性代谢产物的分离与纯化第35-46页
    4.1 实验材料第35-36页
        4.1.1 实验仪器第35-36页
        4.1.2 实验试剂与材料第36页
    4.2 海洋放线菌Y12-26活性组分粗品的制备第36-37页
        4.2.1 海洋放线菌Y12-26的发酵培养第36页
        4.2.2 海洋放线菌Y12-26的发酵液预处理第36页
        4.2.3 海洋放线菌Y12-26活性产物的萃取第36-37页
    4.3 TLC 条件探索第37-38页
        4.3.1 试验方法第37页
        4.3.2 结果分析第37-38页
    4.4 硅胶柱层析第38-40页
        4.4.1 实验方法第38页
        4.4.2 结果讨论第38-40页
    4.5 HPLC 条件探索第40-42页
        4.5.1 实验方法第41页
        4.5.2 结果分析第41-42页
    4.6 HPLC 制备样品第42-46页
        4.6.1 实验方法第42-43页
        4.6.2 样品的纯度分析第43-46页
第五章 海洋放线菌Y12-26活性代谢产物的生物活性测定第46-53页
    5.1 Y12-26-Z活性代谢物的抑菌谱第46-47页
        5.1.1 实验材料和仪器第46页
        5.1.2 实验方法第46页
        5.1.3 实验结果讨论第46-47页
    5.2 Y12-26-Z-1、Y12-26-Z-2、Y12-26-Z-3 的离体生物活性测定第47页
        5.2.1 实验仪器和材料第47页
        5.2.2 实验方法第47页
    5.3 实验结果讨论第47-49页
    5.4 海洋放线菌Y12-26 代谢产物的活体活性的测定第49-53页
        5.4.1 实验方法第49-50页
        5.4.2 实验结果讨论第50-53页
第六章 海洋放线菌Y12-26活性代谢产物的结构解析第53-61页
    6.1 实验仪器第53页
    6.2 茚三酮反应第53-54页
        6.2.1 实验试剂的配制第53页
        6.2.2 实验过程第53页
        6.2.3 实验结果及讨论第53-54页
    6.3 Y12-26-Z-1、Y12-26-Z-2、Y12-26-Z-3的相对分子质量的确定第54-55页
    6.4 化合物Y12-26-Z-1的结构解析第55-61页
        6.4.1 Y12-26-Z-1的核磁相关数据第55-57页
        6.4.2 氨基酸组成的测定第57-60页
        6.4.3 化合物Y12-26-Z-1结构的推测第60-61页
第七章 海洋放线菌Y12-26-Z-1分析方法的研究第61-65页
    7.1 材料与方法第61-62页
        7.1.1 仪器与溶剂第61页
        7.1.2 标准曲线的绘制第61页
        7.1.3 样品预处理第61页
        7.1.4 发酵效价的计算及分析方法的评价第61-62页
    7.2 组分Y12-26-Z-1分析方法的研究第62-65页
        7.2.1 组分Y12-26-Z-1标准曲线的绘制第62-63页
        7.2.2 组分Y12-26-Z-1发酵效价的计算第63页
        7.2.3 分析方法的精密度第63页
        7.2.4 分析方法的准确性-回收率的测定第63-65页
第八章 结论与展望第65-66页
    8.1 通过对本课题的研究,可以得到如下结论第65页
    8.2 对于本课题的展望第65-66页
参考文献第66-74页
致谢第74-75页
附录第75-79页
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