益生菌对硫代乙酰胺所致肝纤维化大鼠的预防作用及其机制的研究

研究背景：肝纤维化的实质是肝脏对损伤及炎症的一种持续修复反应，作为各种慢性肝病发展的共同病理阶段，这一过程是完全可逆的[1]。近年来，肝病与肠源性内毒素血症的关系日益受到重视。肠源性内毒素血症介导的继发性肝损伤对肝病的发生发展有重要影响，且有报道指出肠源性内毒素血症可能参与促进肝纤维化形成的过程[6]。CD14是内毒素作用的主要受体，在介导内毒素信号转导、激活库普弗细胞导致肝损伤的过程中起至关重要的作用。培菲康、整肠生是临床常用的益生菌制剂，其中培菲康可有效降低血浆内毒素水平，目前已知其作用机理主要与补充肠道优势菌、重建肠道微生态平衡及恢复肠黏膜屏障等有关[14,15]。整肠生亦具有较好的调节肠道菌群的作用,但关于其对血浆内毒素水平的影响报道甚少。导师刘立新前期研究发现，硫代乙酰胺(thioacetamide，TAA)在引起肝损伤的同时可自发出现肠源性内毒素血症（intestinal endotoxemia,IETM），其程度更能反映人类肝损伤的实际情况[16]。为此，本研究在TAA诱导大鼠肝纤维化的同时分别给予培菲康与整肠生，通过观察内毒素水平、CD14的表达等相关指标变化，明确培菲康与整肠生对肠源性内毒素血症的影响，进一步探讨益生菌对肝纤维化的形成是否具有预防作用及其可能机制。目的：观察益生菌制剂对肠源性内毒素血症的影响，明确益生菌对肝纤维化的形成是否具有预防作用，并探讨其可能的机制。方法：将50只大鼠随机分为5组，各组10只：正常对照组、TAA组、培菲康组、整肠生低剂量组与整肠生高剂量组。采用TAA皮下注射诱导肝纤维化大鼠模型，培菲康、整肠生低剂量与整肠生高剂量组在TAA皮下注射的同时分别给予培菲康、整肠生相应剂量灌胃。检测血浆内毒素、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）。HE染色、苦味酸-天狼猩红染色观察肝组织形态学改变及胶原纤维沉积状况，免疫组织化学染色检测肝组织CD14的表达。结果：（1）HE染色、苦味酸-天狼猩红染色结果分析：整肠生低剂量、高剂量组，培菲康组肝损伤面积较TAA组明显减轻（29.71.%±6.58% vs 53.93%±9.76%，25.79%±6.76% vs53.93%±9.76%，30.13%±7.80% vs 53.93%±9.76%，F=74.896, P<0.01）。正常对照组、整肠生低剂量组、整肠生高剂量组与培菲康组胶原纤维含量明显低于TAA模型组（0.06%±0.04% vs 1.44%±0.59%，0.60%±0.19% vs 1.44%±0.59%，0.19%±0.83% vs1.44%±0.59%，0.17%±0.52% vs 1.44%±0.59%，F=39.919，P<0.01）。（2）血浆内毒素、血清学指标检测结果分析：正常对照组、整肠生低剂量组、高剂量组与培菲康组内毒素、ALT、AST、LDH和MDA水平均分别较TAA模型组明显降低（内毒素：0.07±0.03 vs 0.25±0.12，0.08±0.04 vs 0.25±0.12，0.09±0.03 vs 0.25±0.12，0.10±0.03 vs 0.25±0.12，F=21.627，P<0.05；ALT：5.98±2.80 vs 12.60±2.77，5.95±2.80vs 12.60±2.77，6.00±4.06 vs 12.60±2.77，6 .98±3.40 vs 12.60±2.77，F=8.012，P<0.05；AST：13.80±2.73 vs 21.83±2.41，16.93±1.88 vs 21.83±2.41，15.00±1.94 vs 21.83±2.41，16.65±1.55 vs 21.83±2.41，F=22.764，P<0.05；LDH：2596.89±533.75 vs 3982.38±813.90，2744.04±670.15 vs 3982.38±813.90，3318.14±555.54 vs 3982.38±813.90，3321.24±633.36vs 3982.38±813.90，F=7.194，P<0.05；MDA：2.83±0.57 vs 5.03±0.76，3.43±0.37 vs 5.03±0.76，3.56±0.54 vs 5.03±0.76，3.55±0.575 vs.03±0.76，F=19.871，P<0.05）。（3）CD14免疫组织化学染色结果显示：CD14在整肠生低剂量、高剂量组，培菲康组阳性表达较TAA模型组明显减弱（2.35±1.64 vs 24.55±12.49，0.26±0.25 vs24.55±12.49，0.21±0.11 vs 24.55±12.49，F=36.311，P<0.01）。结论：(1)益生菌可降低血浆内毒素，减轻TAA所致大鼠肠源性内毒素血症。(2)益生菌通过降低血浆内毒素水平，使肝组织脂质过氧化损伤减轻，肝脏微循环障碍得到改善。(3)益生菌可在一定程度上预防肝纤维化的形成，机制可能与其降低血浆内毒素，下调肝组织CD14的表达，减弱内毒素介导的继发性肝损伤有关。