甘薯乔治亚曲叶病毒CP基因的原核表达及甘薯双生病毒荧光定量PCR检测方法的建立
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论文详情
| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-16页 |
| 1.1 双生病毒的研究进展 | 第9-12页 |
| 1.1.1 双生病毒的发生与危害 | 第9页 |
| 1.1.2 双生病毒属的划分 | 第9-11页 |
| 1.1.3 双生病毒转录复制机制 | 第11页 |
| 1.1.4 Begomoviruses种的划分标准 | 第11-12页 |
| 1.1.5 双生病毒遗传变异的途径 | 第12页 |
| 1.2 甘薯上双生病毒存在的现状 | 第12-13页 |
| 1.2.1 甘薯的生产现状及用途 | 第12-13页 |
| 1.2.2 甘薯上双生病毒的种类和危害 | 第13页 |
| 1.3 侵染甘薯的双生病毒的检测 | 第13-16页 |
| 1.3.1 生物学检测法 | 第13-14页 |
| 1.3.2 血清学检测法 | 第14页 |
| 1.3.3 PCR法 | 第14-15页 |
| 1.3.4 核酸杂交 | 第15页 |
| 1.3.5 RCA检测方法 | 第15页 |
| 1.3.6 深度测序技术 | 第15-16页 |
| 第二章 引言 | 第16-17页 |
| 第三章 甘薯乔治亚曲叶病毒（SPLCGV）外壳蛋白（CP）基因的原核表达及Sweepoviruses荧光定量PCR检测方法的建立 | 第17-38页 |
| 3.1 SPLCGV CP基因的分子变异及原核表达 | 第17-26页 |
| 3.1.1 材料与方法 | 第17-19页 |
| 3.1.1.1 病毒材料 | 第17页 |
| 3.1.1.2 试剂盒、试剂和菌株 | 第17页 |
| 3.1.1.3 引物 | 第17-18页 |
| 3.1.1.4 基本的分子生物学方法 | 第18-19页 |
| (1)目的片段与载体的连接 | 第18页 |
| (2)重组质粒的PCR验证 | 第18页 |
| (3)重组质粒的双酶切 | 第18-19页 |
| (4)双酶切产物的连接 | 第19页 |
| 3.1.2 SPLCGV CP基因的扩增、克隆和序列分析 | 第19-20页 |
| 3.1.3 SPLCGV CP基因原核表达载体的构建 | 第20-21页 |
| 3.1.4 SPLCGV CP基因的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第21页 |
| 3.1.5 SPLCGV CP基因抗体制备 | 第21页 |
| 3.1.6 结果与分析 | 第21-26页 |
| 3.1.6.1 SPLCGV CP基因的克隆 | 第21-22页 |
| 3.1.6.2 SPLCGV CP基因的分子变异分析 | 第22-24页 |
| 3.1.6.3 SPLCGV CP基因的原核表达 | 第24-25页 |
| 3.1.6.4 SPLCGV CP基因的原核表达产物的诱导及SDS-PAGE分析 | 第25-26页 |
| 3.1.6.5 抗体制备 | 第26页 |
| 3.2 甘薯双生病毒荧光定量PCR检测方法的建立 | 第26-38页 |
| 3.2.1 材料与方法 | 第26页 |
| 3.2.1.1 材料 | 第26页 |
| 3.2.1.2 主要试剂和仪器 | 第26页 |
| 3.2.2 引物和探针的合成和设计 | 第26页 |
| 3.2.3 甘薯双生病毒荧光定量PCR方法的建立 | 第26-28页 |
| 3.2.3.1 阳性标准品的制备 | 第26-27页 |
| 3.2.3.2 反应体系和循环体系的优化 | 第27页 |
| 3.2.3.3 灵敏度检测 | 第27-28页 |
| 3.2.3.4 特异性检测 | 第28页 |
| 3.2.3.5 重复性检测 | 第28页 |
| 3.2.4 甘薯双生病毒荧光定量PCR产物的序列测定 | 第28页 |
| 3.2.5 甘薯双生病毒荧光定量PCR检测方法应用性试验 | 第28页 |
| 3.2.6 结果与分析 | 第28-38页 |
| 3.2.6.1 重组质粒标准品的制备 | 第28-29页 |
| 3.2.6.2 引物、探针及循环体系的优化 | 第29-32页 |
| 3.2.6.3 标准曲线的建立 | 第32-33页 |
| 3.2.6.4 灵敏度的检测 | 第33-34页 |
| 3.2.6.5 特异性检 | 第34-35页 |
| 3.2.6.6 重复性检测 | 第35-36页 |
| 3.2.6.7 甘薯双生病毒荧光定量PCR扩增产物的鉴定 | 第36页 |
| 3.2.6.8 甘薯双生病毒荧光定量PCR方法的应用性试验 | 第36-38页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第38-40页 |
| 4.1 明确了我国甘薯上SPLCGV CP基因的分子变异情况 | 第38页 |
| 4.2 在大肠杆菌中高效表达了SPLCGV的CP基因 | 第38页 |
| 4.3 建立了甘薯双生病毒荧光定量PCR的检测方法 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-46页 |
| Abstract | 第46页 |
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