罗非鱼甲基睾丸酮及其代谢产物的药代动力学研究

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罗非鱼(Tilapia),俗称非洲鲫鱼,隶属于鲈形目、鲈形亚目、丽鱼科(Cichlidae)、罗非鱼属。罗非鱼是广盐性鱼类,海淡水中皆可生存,食性广泛,生长迅速。由于其肉质鲜美,易于养殖,已经成为世界性主要养殖鱼类,目前我国南方沿海城市已广泛养殖。本文开展了罗非鱼鱼苗甲基睾丸酮残留研究试验,罗非鱼甲基睾丸酮药物代谢动力学特征和消除规律及其代谢产物的药代动力学特征三个不同方面进行了研究,为罗非鱼养殖业健康和水产品质量安全提供监督检验的技术支撑和理论支持。以20mg/kg和2mg/kg剂量对经检测不含甲基睾丸酮残留的罗非鱼口灌给药,用高效液相色谱法测定血清及组织中甲基睾丸酮(MET)的浓度。用乙酸乙酯提取样品,florisil小柱净化。以3p97软件分析药时数据,MET在两个浓度组均符合一级吸收二室开放模型,吸收半衰期分别为0.29h、0.28h;分布半衰期分别为0.65h、0.57 h,达峰时间分别为是0.78h、0.60 h,消除半衰期分别为18.40h、5.98h。20mg/kg组血清和肌肉中MET残留至144h仍有检出,至216h血清和肌肉样品MET均未检出;肝脏中的药物浓度高于血清和肌肉中的浓度,MET残留至24h有检出,第48h的样品未检出。结果表明:口灌给药,MET在罗非鱼体内吸收、分布快,肝脏为主要吸收和代谢器官,与血清和肌肉相比消除速率要快,血清和肌肉中的MET消除速率相对较缓慢,因此开展MET监督检验除了常规的肌肉样品的检测外,还应增加血液样品的检测。本文利用气相色谱串联质谱法研究了甲基睾丸酮代谢产物17α-甲基- 5β-雄甾-3α,17β-二醇(MeAD)在罗非鱼体内的药代动力学特征。以20mg/kg剂量对罗非鱼口灌甲基睾丸酮(MET)后,取血清样品。加入PH值为5.2的乙酸缓冲盐后,用β葡糖酸酐酶55℃水解3h,乙酸乙酯提取,Water HLB小柱净化,用MSTFA进行衍生化反应,GC-MS法测定血药浓度。3P97药代软件对数据进行处理,结果是MeAD在罗非鱼体内药时曲线符合一级吸收二室开放模型,主要药动学参数为:T1/2(ka)为0.586h ;T1/2(alpha)为4.164h ;T1/2(beta)为362.740h; C(max)为5604.883ng/ml;T(peak)为1.920h。表明,MeAD在罗非鱼体内消除速率非常缓慢,残留量较高,因此,除了加强MET的监督检验外,还应加大对MET代谢物的检测,及早建立其代谢物的检测方法标准。同时还开展了罗非鱼鱼苗甲基睾丸酮残留研究试验,利用添加不同浓度甲基睾丸酮(MET)饲料投喂刚孵化的罗非鱼鱼苗,投喂不同浓度MET饲料30d后,HPLC检测其体内残留量。继续投喂正常未添加MET药物的饲料,30d后再次检测MET残留量。研究结果表明,投喂30d后的罗非鱼苗种,对照组未检出MET残留,其余5个添加MET实验组的MET残留量随着添加浓度的增加而增加;继续投喂未添加MET的正常饲料30d后,所有实验组均未检出MET残留。
摘要第4-6页
ABSTRACT第6-8页
引言第12-27页
    1 罗非鱼和甲基睾丸酮概述第12-13页
        1.1 罗非鱼概述第12页
        1.2 甲基睾丸酮及代谢产物的概述第12-13页
    2 甲基睾丸酮及其代谢产物的研究现状第13-16页
    3 水产动物的药代动力学研究现状第16-18页
        3.1 药代动力学研究原理第16页
        3.2 水产动物药代动力学研究现状第16-18页
    4. 药代动力学研究主要给药途径第18-21页
    5 药代动力学的检测方法第21-23页
        5.1 高效液相色谱法(HPLC)第21-22页
        5.2 气相色谱法(GC)第22页
        5.3 色谱-质谱联用法第22-23页
        5.4 微生物学方法第23页
        5.5 其它方法第23页
    6. 药代动力学软件第23-25页
        6.1 NONLIN 软件第23-24页
        6.2 3P87/3P97 软件第24-25页
    7 研究目的和意义第25-27页
第一章 甲基睾丸酮在罗非鱼体内的药代动力学及消除规律第27-35页
    1 材料与方法第27-29页
        1.1 实验动物第27页
        1.2 药品与试剂第27页
        1.3 仪器设备第27页
        1.4 色谱条件第27-28页
        1.5 给药及样品采集第28页
        1.6 样品处理第28-29页
        1.7 标准曲线的制备及回收率和精密度的测定第29页
        1.8 数据处理第29页
    2 结果与分析第29-32页
        2.1 标准曲线与线性范围第29-30页
        2.2 回收率、精密度与检测限第30页
        2.3 口灌给药后MET 在罗非鱼体内的含量变化第30-31页
        2.4 MET 在罗非鱼体内的药代动力学特征第31-32页
    3 讨论第32-35页
        3.1 样品前处理第32-33页
        3.2 药代动力学特征第33页
        3.3 MET 在罗非鱼各组织中的消除规律第33-35页
第二章 17α-甲基- 5β-雄甾-3α,17β-二醇在罗非鱼体内的药物代谢动力学研究第35-42页
    1. 材料与方法第35-37页
        1.1 实验动物第35页
        1.2 药品与试剂第35页
        1.3 仪器设备第35页
        1.4 气相色谱-质谱条件第35-36页
        1.5 给药及样品采集第36页
        1.6 内标及标准储备溶液的制备第36页
        1.7 样品处理第36-37页
        1.8 标准曲线的制备及回收率和精密度的测定第37页
        1.9 数据处理第37页
    2 结果与分析第37-40页
        2.1 标准曲线与线性范围第37-38页
        2.2 回收率、精密度与检测限第38-39页
        2.3 MeAD 在罗非鱼体内的药代动力学特征第39-40页
    3 讨论第40-42页
        3.1 分析方法的建立第40页
        3.2 衍生化试剂的选择第40-41页
        3.3 MeAD 的药代动力学特征第41-42页
第三章 罗非鱼鱼苗中甲基睾丸酮残留研究试验第42-47页
    1 实验部分第42-44页
        1.1 仪器、试剂与材料第42页
        1.2 实验步骤第42-43页
        1.3 液相色谱测定第43-44页
    2 结果第44-46页
        2.1 标准曲线、回收率、精密度与检测限第44页
        2.2 鱼苗喂药和停药30d 体内甲基睾丸酮残留量第44-46页
    3 讨论第46-47页
        3.1 罗非鱼鱼苗中甲基睾丸酮监督检测时间的初步确定第46页
        3.2 甲基睾丸酮浓度对鱼苗生长影响第46页
        3.3 关于检测方法改进第46-47页
结论第47-48页
参考文献第48-56页
已完成文章第56-57页
致谢第57页
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