恶性肿瘤是导致人类死亡的主要“杀手”之一,全球平均每8个死亡病例中就有1人死于癌症。虽然目前的抗肿瘤药物对大多数肿瘤有一定疗效,但仍存在着严重的副作用。因此,寻找结构新颖、高效、低毒的抗肿瘤药物仍是当前肿瘤治疗的当务之急。海洋物种的生物多样性及其代谢产物的化学多样性,使其成为抗肿瘤药物的重要源泉。利用海洋软体动物文蛤治疗肿瘤在我国具有悠久的历史。本研究从文蛤体液中分离纯化得到一种新的抗肿瘤多肽,并对其抗肿瘤机制进行了初步研究。本文采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析、凝胶过滤、反相层析等分离技术,从文蛤体液中分离纯化得到具有抗肿瘤活性的多肽。SDS-PAGE检测显示为单一条带,分子量约为15 KDa,命名为Mere15。以MTT比色法检测文蛤多肽Mere15在体外对肿瘤细胞株和正常细胞株的增殖抑制活性,结果表明Mere15具有较好的广谱抗癌活性,但对正常细胞却没有明显的抑制作用。对裸小鼠人肺癌移植瘤进行体内抑癌作用研究发现,Mere15对人肺癌移植瘤具有显著的抑制作用,且副作用不明显。为进一步研究Mere15的抗肿瘤机制,采用倒置显微镜观察、扫描电镜观察和Hoechst 33342染色法观察Mere15作用后细胞形态学的变化;采用线粒体跨膜电位检测、Annexin V-FITC/PI双染法和DNA ladder琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;采用Western blot检测细胞凋亡信号通路;采用流式细胞仪和微管蛋白免疫荧光检测技术分析细胞周期分布及微管蛋白聚合。结果发现,Mere15作用后的肿瘤细胞皱缩,细胞膜发泡,细胞核裂解;线粒体膜电位降低,磷脂酰丝氨酸外翻,DNA断裂;线粒体信号通路和死亡受体信号通路相关的蛋白表达发生变化。G2/M期细胞比例逐渐升高,微管蛋白聚合受到抑制。总之,上述结果表明Mere15具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用机制与诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞有关。
