血浆游离DNA检测在恶性淋巴瘤早期诊断中的意义

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目的选取临床常见的弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B—cell lymphoma, DLBCL)为研究对象,探讨血浆游离DNA检测对非霍奇金淋巴瘤(Non-hodgkin lymphoma, NHL)早期诊断及治疗评价的意义。方法1.分别提取20例初治及复发DLBCL、10例T-NHL患者、20名健康人及10例淋巴结炎性肿大患者血浆游离DNA,通过PCR的方法检测IgH、bcl-2/IgH基因克隆性重排,并分别与外周血及骨髓单个核细胞DNA进行比较观察。2.分别提取22例初治及复发DLBCL患者、10名健康人及10例淋巴结炎性肿大患者血浆游离DNA及单个核细胞DNA,通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR, MSP)和非甲基化特异性PCR (unmethylation-specific PCR, unMSP)分别检测血浆游离SHP-1、P16基因启动子区域甲基化状态;RT-PCR方法分别检测单个核细胞SHP-1及P16基因甲基化后mRNA的表达情况。结果1.20例初治与复发DLBCL、10例T-NHL病例全部成功提取出血浆游离DNA,20名正常人及10例淋巴结炎性肿大患者均未提取出血浆游离DNA;20例初治与复发DLBCL病例中12例IgH基因重排阳性(60%),10例Bcl-2/IgH基因重排阳性(50%);5例临床缓解的DLBCL病例未检出IgH基因重排,4例临床缓解的DLBCL病例未检出Bc1-2/IgH基因重排,10例T-NHL病例末检出IgH及Bc1-2/IgH基因重排;患者血浆游离IgH、Bcl-2/IgH基因克隆性重排分别与外周血及骨髓单个核细胞IgH、Bcl-2/IgH基因克隆性重排结果对比显示,血浆游离DNA的阳性率高于外周血及骨髓单个核细胞DNA,但差异不具有统计学意义(P>0.05),可能需要积累更多的病例。2.22例DLBCL中21例存在血浆游离SHP-1基因启动子区域甲基化,16例存在血浆游离P16基因启动子区域甲基化,甲基化频率分别为91.0%及71.0%;SHP-1、P16基因启动子区甲基化后该基因处于沉默状态故而相应mRNA表达减少或完全消失,而10名健康人及10例淋巴结炎性肿大患者SHP-1、P16基因mRNA的表达均为阳性;动态观察显示缓解期患者血浆游离SHP-1、P16基因启动子区域均呈持续甲基化状态。结论1.采用血浆游离DNA检测DLBCL患者IgH及Bc1-2/IgH克隆性重排具有较高的临床诊断价值,可提高淋巴瘤患者的早期诊断率,且敏感性大于外周血及骨髓单个核细胞DNA,标本取材简单方便,对患者的治疗反应监测也有重要参考价值。2.血浆游离SHP-1、P16基因启动子区域在DLBCL中存在高度甲基化,由其所致的SHP-1、P16基因沉默可能是肿瘤发生的重要因素之一,血浆游离SHP-1、P16基因甲基化可作为NHL一个良好的分子诊断标记及可能的治疗靶点。
中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
符号说明第10-13页
前言第13-17页
    研究现状、成果第13-16页
    研究目的、方法第16-17页
一、血浆游离Bcl-2/IgH、IgH基因重排在非霍奇金淋巴瘤诊断及治疗评价中的应用第17-29页
    1.1 对象与方法第17-21页
        1.1.1 病例和对照第17-18页
        1.1.2 主要试剂和仪器第18-19页
        1.1.3 标本处理及DNA提取第19页
        1.1.4 PCR引物设计第19-20页
        1.1.5 PCR合成第20页
        1.1.6 统计学处理第20-21页
        1.1.7 统计学处理第21页
    1.2 结果第21-24页
        1.2.1 结果判断第21页
        1.2.2 游离DNA提取结果第21-23页
        1.2.3 IgH基因重排结果第23页
        1.2.4 血浆游离IgH基因重排与外周血单个核细胞IgH基因重排比较第23页
        1.2.5 血浆游离IgH基因重排与骨髓单个核细胞IgH基因重排比较第23页
        1.2.6 游离Bcl-2/IgH基因重排结果第23-24页
        1.2.7 血浆游离Bcl-2/IgH基因重排与外周血单个核细胞Bcl-2/IgH基因重排比较第24页
        1.2.8 血浆游离Bcl-2/IgH基因重排与骨髓单个核细胞Bcl-2/IgH基因重排比较第24页
    1.3 讨论第24-28页
    1.4 小结第28-29页
二、血浆游离DNA的SHP-1、P16基因甲基化状况在淋巴瘤早期诊断中的意义第29-49页
    2.1 对象和方法第30-38页
        2.1.1 病例和对照第30页
        2.1.2 主要试剂和仪器第30-31页
        2.1.3 血浆游离及外周血单个核细胞DNA的提取第31-33页
        2.1.4 MS-PCR和unMS-PCR分析第33-36页
        2.1.5 RT-PCR第36-37页
        2.1.6 统计学处理第37-38页
        2.1.7 统计学处理第38页
    2.2 结果第38-45页
        2.2.1 血浆游离SHP-1基因启动子区域甲基化检测结果第38-39页
        2.2.2 骨髓单个核细胞SHP-1基因mRNA的表达第39页
        2.2.3 血浆游离P16基因启动子区域甲基化检测结果第39-40页
        2.2.4 骨髓单个核细胞SHP-1基因mRNA的表达第40-45页
    2.3 讨论第45-47页
    2.4 小结第47-49页
全文结论第49-50页
论文创新点第50-51页
参考文献第51-57页
发表论文和参加科研情况说明第57-58页
附录第58-61页
综述 表观遗传学在淋巴瘤中的研究进展第61-77页
    参考文献第71-77页
致谢第77-78页
附件第78-94页
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