鸡球虫病是由顶复门艾美耳属的球虫寄生于鸡的肠上皮细胞内所引起的一种原虫病,是世界范围内最严重的家禽寄生虫病之一,严重危害养禽业发展。鸡球虫病被美国农业部列为对禽类危害最为严重的五大疾病之一,对我国乃至全世界的养禽业造成巨大的经济损失。Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)是一类高度保守的蛋白质家族,通过启动宿主的免疫应答对病原体进行识别,在减少和清除病原体中起重要作用。在鸡体内已经鉴定出的TLR基因至少10个,Ch TLR3、Ch TLR7和Ch TLR21为识别病毒的受体。周作勇等(2011)、秦波等(2012)、Zhang等(2012)报道柔嫩艾美耳球虫在感染过程中能够被天然免疫系统所识别,引起多种Ch TLRs的表达变化。Han等(2011)报道首次在柔嫩艾美耳球虫中发现病毒样粒子。Wu等(2016)破译柔嫩艾美耳球虫病毒全基因组。病毒粒子的存在可能影响宿主天然免疫系统对柔嫩艾美耳球虫的识别。目前关于携病毒柔嫩艾美耳球虫诱导宿主TLRs表达的变化等研究尚未见报道。本试验通过携病毒和无病毒柔嫩艾美耳球虫诱导宿主TLRs表达的变化、炎性因子分泌和雏鸡盲肠病变的观察研究,以初步确定携病毒柔嫩艾美耳球虫感染激活宿主天然免疫TLRs信号通路的作用。为揭示鸡体抗柔嫩艾美耳球虫感染的天然免疫机理等奠定基础。主要研究内容如下:携病毒和无病毒柔嫩艾美耳球虫诱导鸡巨噬细胞TLRs m RNA表达的变化用携病毒和无病毒柔嫩艾美耳球虫刺激鸡巨噬细胞,分别于不同时间(0h,1h,2h,4h,6h,8h)收集鸡巨噬细胞提取总RNA,然后用q RT-PCR检测鸡TLRs(Ch TLRs)表达的动态变化。结果表明,携病毒柔嫩艾美耳球虫刺激鸡巨噬细胞引起Ch TLR1、4、7、15和21 m RNA表达水平上调,Ch TLR2、3和5 m RNA表达水平下调。无病毒柔嫩艾美耳球虫刺激鸡巨噬细胞引起Ch TLR1、4、15和21 m RNA表达水平上调,Ch TLR2、3、5和7 m RNA表达水平下调。表明携病毒和无病毒柔嫩艾美耳球虫刺激鸡巨噬细胞后诱导多种TLRs表达水平的动态变化。与无病毒组相比,在8h时携病毒组Ch TLR3 m RNA表达水平明显升高,携病毒组Ch TLR7表达水平上调而无病毒组下调,携病毒组Ch TLR21表达水平上调比无病毒组显著,表明Ch TLR3、Ch TLR7、Ch TLR21可能与鸡体抗柔嫩艾美耳球虫病毒的先天性免疫应答有关。携病毒和无病毒柔嫩艾美耳球虫诱导雏鸡盲肠TLRs m RNA表达的变化用携病毒和无病毒柔嫩艾美耳球虫分别感染雏鸡,并设置健康对照组。采用q RT-PCR方法检测感染后2h,6h,12h,24h,48h,72h雏鸡盲肠组织TLRs m RNA表达水平。结果表明,携病毒和无病毒柔嫩艾美耳球虫感染雏鸡后均可诱导盲肠上皮细胞多种Ch TLR1、2、3、4、5、7、15和21 m RNA表达水平的动态变化。携病毒柔嫩艾美耳球虫感染鸡后,Ch TLR1、2、4、5、7、15和21 m RNA表达水平在感染后第6h均达到最高值。而无病毒柔嫩艾美耳球虫感染鸡后,Ch TLR1、2、4、5、7、15和21 m RNA表达水平均在感染后24h达到最高值。这种时间差异表明感染携病毒柔嫩艾美耳球虫组比感染无病毒柔嫩艾美耳球虫组更早的引起免疫应答。携病毒组在感染后24h Ch TLR3 m RNA的表达水平上调并达到高峰。识别病毒的受体Ch TLR3、Ch TLR7和Ch TLR21变化可能与鸡体抗柔嫩艾美耳球虫病毒的先天性免疫应答有关。感染携病毒和无病毒柔嫩艾美耳球虫雏鸡IL-6和IFN-β的分泌及盲肠病变观察采集感染携病毒和无病毒柔嫩艾美耳球虫雏鸡血清,用ELISA方法检测IL-6和IFN-β的分泌水平,并将感染后的雏鸡盲肠制作石蜡切片观察病变。结果表明,感染携病毒和无病毒柔嫩艾美耳球虫组IL-6和IFN-β均有上调,携病毒组IL-6和IFN-β分泌水平较无病毒组高。感染携病毒柔嫩艾美耳球虫的雏鸡盲肠较感染无病毒柔嫩艾美耳球虫的雏鸡表现出更为严重的水肿、肠上皮细胞碎裂崩解、肠黏膜破损断裂等病理变化。初步推断宿主抗携病毒和无病毒柔嫩艾美耳球虫感染和虫体致病机制可能不同。
