酒酒球菌生长必需氨基酸及对MLF的影响

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酒酒球菌(Oenococcus oeni)属于革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性、兼性厌氧、异型发酵球菌。在苛刻的酒环境中,酒酒球菌对营养成分的要求较高,因而明确酒酒球菌的各种营养需求对葡萄酒的实际生产有着重要意义。通常来说,酒酒球菌可利用的氮源主要有蛋白质、多肽、铵盐和氨基酸,葡萄酒中的氮源主要是铵盐和氨基酸,因而游离氨基酸的种类和含量对酒酒球菌的生长代谢起着关键作用。又因为经由葡萄酒发酵而留存在葡萄酒中的氨基酸与消费者的身体健康密切相关,所以对葡萄酒及葡萄酒微生物发酵利用氨基酸的研究对葡萄酒生产工艺和品质都有着重要意义。本文分析了酒酒球菌SD-2a生长必需氨基酸及其对苹果酸乳酸发酵(Malolactic fermentation, MLF)的影响,同时监测了葡萄酒在MLF前后的氨基酸成分含量变化。(1)通过在19种分别缺失一种氨基酸培养基中培养酒酒球菌SD-2a的方法,结合菌落计数和数据分析,得出L-谷氨酸和L-半胱氨酸为酒酒球菌SD-2a生长的必需氨基酸,L-精氨酸、L-脯氨酸、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-苏氨酸和L-组氨酸对酒酒球菌SD-2a生长有促进作用。(2)通过在缺失必需氨基酸的BM培养基中添加L-苹果酸和/或柠檬酸以及调整必需氨基酸浓度水平的方法,分析了酒酒球菌SD-2a在不同条件下的生长情况以及降酸能力。结果表明L-苹果酸和/或柠檬酸能在不同程度上补充必需氨基酸缺失后酒酒球菌SD-2a的营养需求,促进菌体生长及降酸。必需氨基酸对酒酒球菌SD-2a有最适生长浓度,其中L-谷氨酸的最适生长浓度为1mmol/L,L-半胱氨酸的最适生长浓度为6mmol/L。(3)通过接种酒酒球菌SD-2a至蛇龙珠葡萄原酒引导其MLF的方法,监测MLF前后的各氨基酸含量,结果表明在酒酒球菌SD-2a的分解代谢作用下,半胱氨酸和蛋氨酸含量分别增加5mg/L和17.03mg/L,而其余各氨基酸均被消耗原含量的50%以上。
摘要第5-6页
ABSTRACT第6-7页
第一章 文献综述第11-28页
    1.1 葡萄酒中酒酒球菌有机酸代谢第11-16页
        1.1.1 葡萄酒中的有机酸第11页
        1.1.2 有机酸的种类与来源第11-12页
            1.1.2.1 酒石酸第11-12页
            1.1.2.2 苹果酸第12页
            1.1.2.3 乳酸第12页
            1.1.2.4 柠檬酸第12页
        1.1.3 有机酸对葡萄酒的影响第12-13页
        1.1.4 苹果酸的代谢第13-14页
        1.1.5 柠檬酸的代谢第14-16页
    1.2 葡萄酒中酒酒球菌氨基酸的代谢第16-25页
        1.2.1 氨基酸的形成第16页
        1.2.2 氨基酸在葡萄酒中的作用第16-17页
        1.2.3 乳酸菌对氨基酸的代谢第17-25页
            1.2.3.1 氨基酸的转氨作用第17-23页
            1.2.3.2 氨基酸的裂解第23-24页
            1.2.3.3 氨基酸的脱羧和脱硫第24页
            1.2.3.4 氨基酸的脱氨基作用第24-25页
    1.3 葡萄酒中有机酸对氨基酸代谢的作用第25-26页
    1.4 研究目的与意义第26页
    1.5 研究内容第26-28页
第二章 酒酒球菌 SD-2a 氨基酸需求分析第28-34页
    2.1 材料与方法第28-30页
        2.1.1 试验材料第28-30页
            2.1.1.1 试验菌株第28页
            2.1.1.2 培养基第28-29页
            2.1.1.3 仪器与设备第29-30页
        2.1.2 试验方法第30页
            2.1.2.1 细胞活化第30页
            2.1.2.2 细胞培养及监测第30页
            2.1.2.3 监测方法第30页
    2.2 结果与分析第30-33页
        2.2.1 20 种培养基中酒酒球菌 SD-2a 的 OD600第30-31页
        2.2.2 最大生长速率与最终生物量第31-33页
    2.3 讨论第33页
    2.4 小结第33-34页
第三章 酒酒球菌 SD-2a 必需氨基酸的缺失及浓度对苹果酸和柠檬酸代谢的影响第34-44页
    3.1 材料与方法第34-35页
        3.1.1 实验材料第34页
            3.1.1.1 试验菌株第34页
            3.1.1.2 培养基第34页
            3.1.1.3 仪器与设备第34页
        3.1.2 试验方法第34-35页
            3.1.2.1 有机酸代谢对酒酒球菌 SD-2a 生长过程中氨基酸需求的影响第34页
            3.1.2.2 必需氨基酸浓度对酒酒球菌 SD-2a 生长和降酸的影响第34-35页
            3.1.2.3 监测方法第35页
    3.2 结果与分析第35-42页
        3.2.1 有机酸测定的标准曲线第35-37页
        3.2.2 添加有机酸的必需氨基酸缺失培养基中酒酒球菌 SD-2a 的生长情况第37页
        3.2.3 添加有机酸的必需氨基酸缺失培养基中酒酒球菌 SD-2a 的降酸情况第37-39页
        3.2.4 必需氨基酸浓度对酒酒球菌 SD-2a 生长的影响第39-40页
        3.2.5 必需氨基酸浓度对酒酒球菌 SD-2a 降酸的影响第40-42页
    3.3 讨论第42-43页
    3.4 小结第43-44页
第四章 酒酒球菌 SD-2a 进行 MLF 前后干红葡萄酒中氨基酸含量的变化第44-52页
    4.1 材料与方法第44-46页
        4.1.1 试验材料第44-45页
            4.1.1.1 试验菌株第44页
            4.1.1.2 试验试剂与培养基第44-45页
            4.1.1.3 仪器与设备第45页
        4.1.2 试验方法第45-46页
            4.1.2.1 发酵方法第45-46页
            4.1.2.2 氨基酸分析第46页
    4.2 结果与分析第46-50页
        4.2.1 人体必需氨基酸含量的变化第46-47页
        4.2.2 谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸和酪氨酸含量的变化第47-48页
        4.2.3 丙氨酸、丝氨酸和甘氨酸含量的变化第48页
        4.2.4 组氨酸、脯氨酸和精氨酸含量的变化第48-49页
        4.2.5 葡萄酒发酵过程中氨基酸百分比的变化第49-50页
    4.3 讨论第50-51页
    4.4 小结第51-52页
第五章 结论与展望第52-53页
    5.1 结论第52页
    5.2 展望第52-53页
参考文献第53-58页
致谢第58-59页
作者简介第59页
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