化痰散结方对人乳腺癌耐药细胞的影响及机制

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目的:通过研究化痰散结方对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR耐药相关蛋白和凋亡抑制基因表达的影响,阐发其逆转多药耐药的作用机理,为中医治疗乳腺癌化疗中普遍存在的耐药相关问题提供理论和实验依据。方法:1.化痰散结方对MCF-7/ADR细胞多药耐药相关蛋白及基因的研究1)MTT法检测化痰散结方对MCF-7/ADR细胞系的耐药逆转作用,计算耐药逆转倍数;2)流式细胞术检测含药血清作用前后MCF-7/ADR细胞表面P-gp的表达变化;3)免疫印迹技术检测化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR细胞中MRP蛋白(多药耐药相关蛋白)表达的影响;4)RT-PCR法检测含药血清作用前后MCF-7/ADR细胞中基因MDR1及MRP1的表达变化。2.化痰散结方对MCF-7/ADR细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用1)通过克隆形成实验,观察含药血清对细胞克隆形成的影响,计算克隆形成率;2)流式细胞技术检测化痰散结方对MCF-7/ADR细胞的细胞周期的影响;3)在荧光显微镜、电子显微镜下观察含药血清作用前后细胞的形态变化;4)流式细胞技术检测化痰散结方对MCF-7/ADR细胞凋亡抑制基因Bcl-2的影响。结果:1.化痰散结方逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药及机制研究1)化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR细胞的增殖有明显抑制作用,并随含药血清浓度提高、作用时间延长抑制作用增强。2)化痰散结方含药血清能显著抑制MCF-7/ADR细胞P-gp的表达,与对照组比较有统计学意义(P<0.01);10%含药血清与ADM合用组同VRP+ADM+10%正常鼠血清组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3)ADM可诱导MRP表达上调,而含药血清可使MRP表达下降,其作用随浓度增加和作用时间的延长而增强。4)MDR1及MRP1mRNA在MCF-7/ADR细胞中高表达,化痰散结方含药血清作用于MCF-7/ADR后,MDR1及MRP1mRNA的表达下降,呈浓度依赖性。2.化痰散结方对MCF-7/ADR细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用1)随化痰散结方含药血清浓度递增,细胞克隆形成率逐渐下降。2)化痰散结方含药血清可使耐药细胞株阻滞于G0-G1期,并通过启动凋亡机制阻止耐药细胞株增殖,并呈量效关系(P<0.05)。3)化痰散结方对MCF-7/ADR细胞超微结构的影响表明随着药物浓度提高和作用时间延长,凋亡细胞的比例增高。4)化痰散结方含药血清组可显著下调细胞凋亡抑制基因Bcl-2的表达,并呈量效关系(P<0.05)。结论:1.化痰散结方作用于MCF-7/ADR细胞的耐药相关蛋白和基因,其机制可能与下调耐药细胞MDR1及MRP1的mRNA和蛋白表达,减少药物外排,增加耐药细胞内药物浓度有关。2.化痰散结方具有抑制肿瘤增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能是作用于耐药细胞G1/S节点,使耐药细胞株阻滞于G0-G1期,下调细胞凋亡抑制基因Bcl-2的表达,通过启动凋亡机制阻止耐药细胞株增殖。
提要第3-5页
ABSTRACT第5-7页
前言第11-14页
    一、研究背景第11-12页
    二、研究思路和方法第12页
    三、理论探讨第12-13页
    四、意义第13-14页
第一部分 化痰散结方逆转MCF-7/ADR 细胞多药耐药及机制研究第14-33页
    1 化痰散结方联合ADM 对MCF-7/ADR 细胞的细胞毒作用研究第14-21页
        1.1 实验材料第14-18页
        1.2 实验方法第18-19页
        1.3 实验结果第19-21页
    2 化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR 细胞P-gp 蛋白表达的研究第21-24页
        2.1 实验材料第21页
        2.2 实验方法第21-22页
        2.3 实验结果第22-24页
    3 化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR 细胞MRP 蛋白表达的研究第24-28页
        3.1 实验材料第24页
        3.2 实验方法第24-25页
        3.3 实验结果第25-28页
    4 化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR 细胞基因MDR1、MRP1 表达的研究第28-33页
        4.1 实验材料第28页
        4.2 方法第28-31页
        4.3 结果第31-33页
第二部分 化痰散结方对MCF-7/ADR 细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用第33-45页
    1 实验材料第33-34页
        1.1 细胞系第33页
        1.2 主要试剂、实验药物及试剂盒第33-34页
        1.3 主要仪器设备第34页
        1.4 主要溶液的配制第34页
    2 实验方法第34-45页
        2.1 化痰散结方联合ADM 对MCF-7/ADR 细胞克隆形成的影响第34-36页
        2.2 化痰散结方含药血清诱导MCF-7/ADR 细胞凋亡的实验研究第36-39页
        2.3 化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR 细胞超微结构的影响第39-42页
        2.4 化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR 细胞Bcl-2 基因表达的影响第42-45页
讨论第45-64页
    1 中医对乳腺癌的认识第45-47页
        1.1 中医归属第45-46页
        1.2 病因病机分析第46页
        1.3 治疗沿革第46-47页
    2 现代医学对乳腺癌的认识第47-48页
    3 乳腺癌化疗多药耐药产生机理第48-49页
        3.1 膜蛋白介导的耐药机制第48-49页
    4 细胞凋亡与多药耐药第49-51页
        4.1 Bcl-2 与多药耐药第50-51页
        4.2 p53 与多药耐药第51页
        4.3 c-myc 与多药耐药第51页
    5 西医逆转多药耐药的研究第51-53页
        5.1 逆转途径的研究第52页
        5.2 逆转剂的研究第52-53页
    6 中药逆转多药耐药的研究第53-54页
    7 化痰散结方组方及功效第54-60页
        7.1 立方依据第54-56页
        7.2 组成及方义分析第56-57页
        7.3 药物功效溯源第57-58页
        7.4 现代药理研究第58-60页
    8 实验结果分析第60-64页
        第一部分 化痰散结方逆转MCF-7/ADR 细胞多药耐药及机制研究第60-61页
            1 化痰散结方联合ADM 对MCF-7/ADR 细胞的细胞毒作用研究第60页
            2 化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR 细胞P-gp 蛋白表达的研究第60-61页
            3 化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR 细胞MRP 蛋白表达的研究第61页
            4 化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR 细胞基因MDR1、MRP 表达的研究第61页
        第二部分 化痰散结方对MCF-7/ADR 细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用第61-64页
            1 化痰散结方联合ADM 对MCF-7/ADR 细胞克隆形成的影响第61页
            2 化痰散结方含药血清诱导MCF-7/ADR 细胞凋亡的实验研究第61-62页
            3 化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR 细胞超微结构的影响第62页
            4 化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR 细胞Bcl-2 基因表达的影响第62-64页
结论第64-65页
参考文献第65-70页
结语第70-71页
文献综述第71-93页
    参考文献第87-93页
附录第93-95页
致谢第95-96页
查新报告第96-102页
发表的论文第102-121页
科研任务书第121-127页
详细摘要第127-134页
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