摘要 | 第3-4页 |
ABSTRACT | 第4-5页 |
第一章 文献综述 | 第10-32页 |
1.1 基因治疗药物研发概况 | 第10-11页 |
1.2 血管生长基因治疗的研究进展 | 第11-15页 |
1.2.1 血管生长基本生理过程 | 第11-12页 |
1.2.2 血管生长基因治疗药物的研发概况 | 第12-13页 |
1.2.3 血管生长基因载体系统研究与应用现状 | 第13-14页 |
1.2.4 血管生长基因导入途径 | 第14-15页 |
1.3 HGF基因治疗研究进展 | 第15-25页 |
1.3.1 HGF研究概述 | 第15-21页 |
1.3.2 HGF基因治疗肢体缺血性疾病的研究进展 | 第21-23页 |
1.3.3 HGF基因治疗心脏缺血性疾病的研究进展 | 第23-24页 |
1.3.4 HGF毒理安全性研究结果 | 第24-25页 |
1.4 质粒制备工艺和质量标准研究进展 | 第25-29页 |
1.4.1 制备工艺研究进展 | 第25-28页 |
1.4.2 质量标准研究进展 | 第28-29页 |
1.5 本论文的选题思路及主要工作 | 第29-32页 |
1.5.1 选题思路 | 第29-31页 |
1.5.2 主要工作 | 第31-32页 |
第二章 培养条件研究 | 第32-42页 |
2.1 材料与仪器 | 第32-33页 |
2.1.1 实验材料 | 第32页 |
2.1.2 实验仪器 | 第32-33页 |
2.2 实验方法 | 第33-35页 |
2.2.1 基本摇瓶培养方法 | 第33页 |
2.2.2 培养基对细菌生长及质粒产量的影响 | 第33-34页 |
2.2.3 培养温度对细菌生长及质粒产量的影响 | 第34页 |
2.2.4 摇床培养转速对细菌生长及质粒产量的影响 | 第34页 |
2.2.5 质粒产量的检测方法 | 第34-35页 |
2.2.6 菌体浓度与质量的检测方法 | 第35页 |
2.3 结果与讨论 | 第35-41页 |
2.3.1 培养基对细菌生长及质粒产量的影响 | 第35-37页 |
2.3.2 培养温度对细菌生长及质粒产量的影响 | 第37-39页 |
2.3.3 摇床转速对细菌生长及质粒产量的影响 | 第39-41页 |
2.4 小结 | 第41-42页 |
第三章 发酵工艺研究 | 第42-57页 |
3.1 材料与仪器 | 第42-43页 |
3.1.1 实验材料 | 第42页 |
3.1.2 实验仪器 | 第42-43页 |
3.2 实验方法 | 第43-45页 |
3.2.1 发酵种子液的制备 | 第43页 |
3.2.2 发酵过程及监控 | 第43-44页 |
3.2.3 培养基对发酵的影响 | 第44页 |
3.2.4 接种量对发酵的影响 | 第44页 |
3.2.5 发酵时间对发酵的影响 | 第44页 |
3.2.6 菌体浓度与质量的检测方法 | 第44页 |
3.2.7 质粒产量的检测方法 | 第44-45页 |
3.3 结果与讨论 | 第45-56页 |
3.3.1 培养基对发酵的影响 | 第45-49页 |
3.3.2 接种量对发酵的影响 | 第49-53页 |
3.3.3 发酵时间对发酵的影响 | 第53-56页 |
3.4 小结 | 第56-57页 |
第四章 小试纯化工艺研究 | 第57-69页 |
4.1 材料与仪器 | 第57-59页 |
4.1.1 实验材料 | 第57页 |
4.1.2 实验仪器 | 第57-58页 |
4.1.3 主要耗材 | 第58-59页 |
4.2 实验方法 | 第59-63页 |
4.2.1 纯化方法的确定 | 第59页 |
4.2.2 整体纯化线路图 | 第59-60页 |
4.2.3 整体纯化思路 | 第60-61页 |
4.2.4 基本纯化方法 | 第61-63页 |
4.3 结果与讨论 | 第63-67页 |
4.3.1 破菌及澄清 | 第63页 |
4.3.2 超滤浓缩 | 第63-64页 |
4.3.3 第一步层析 | 第64-65页 |
4.3.4 第二步层析 | 第65-66页 |
4.3.5 第三步层析和超滤 | 第66-67页 |
4.4 小结 | 第67-69页 |
第五章 中试纯化工艺研究 | 第69-77页 |
5.1 材料与仪器 | 第69-71页 |
5.1.1 实验材料 | 第69页 |
5.1.2 实验仪器 | 第69-70页 |
5.1.3 主要耗材 | 第70-71页 |
5.2 实验方法 | 第71-72页 |
5.2.1 主要溶液的配制 | 第71页 |
5.2.2 菌体的破碎 | 第71页 |
5.2.3 破菌液的澄清 | 第71页 |
5.2.4 超滤浓缩 | 第71页 |
5.2.5 第一步层析 | 第71-72页 |
5.2.6 第二步层析 | 第72页 |
5.2.7 第三步层析 | 第72页 |
5.2.8 超滤浓缩 | 第72页 |
5.3 结果与讨论 | 第72-76页 |
5.3.1 破菌、澄清和超滤浓缩 | 第72-73页 |
5.3.2 第一步层析和第二步层析结果 | 第73-74页 |
5.3.3 第三步层析和超滤 | 第74-75页 |
5.3.4 中试纯化工艺的稳定性 | 第75-76页 |
5.4 小结 | 第76-77页 |
第六章 重组人肝细胞生长因子裸质粒的质量标准 | 第77-88页 |
6.1 材料与仪器 | 第77-78页 |
6.1.1 实验材料 | 第77-78页 |
6.1.2 实验仪器 | 第78页 |
6.2 实验方法 | 第78-80页 |
6.2.1 质粒含量 | 第78-79页 |
6.2.2 目的基因表达量检查 | 第79-80页 |
6.2.3 目的基因表达产物生物活性检测 | 第80页 |
6.3 结果与讨论 | 第80-87页 |
6.3.1 质粒含量 | 第80-83页 |
6.3.2 目的基因表达量检查 | 第83-85页 |
6.3.3 目的基因表达产物生物活性检测 | 第85-87页 |
6.4 小结 | 第87-88页 |
第七章 下肢缺血性疾病模型的治疗效果研究 | 第88-98页 |
7.1 材料与仪器 | 第88页 |
7.1.1 实验材料 | 第88页 |
7.1.2 实验动物 | 第88页 |
7.2 实验方法 | 第88-92页 |
7.2.1 兔下肢动脉性缺血模型 | 第88-90页 |
7.2.2 动物分组与给药方法 | 第90页 |
7.2.3 实验流程 | 第90-91页 |
7.2.4 指标及其观察方法 | 第91-92页 |
7.3 结果与讨论 | 第92-96页 |
7.3.1 用选择性髂内动脉造影术,测定缺血部位侧支血管数量的结果 | 第92-94页 |
7.3.2 缺血部位新生毛细血管密度的组织学观察结果 | 第94-95页 |
7.3.3 多普勒测定髂内动脉血流量结果 | 第95-96页 |
7.4 小结 | 第96-98页 |
第八章 结论与展望 | 第98-101页 |
8.1 结论 | 第98-99页 |
8.2 创新点 | 第99-100页 |
8.3 展望 | 第100-101页 |
参考文献 | 第101-109页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第109-111页 |
致谢 | 第111页 |