红豆ACE抑制肽的制备及初步纯化和螯合特性的研究

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红豆蛋白是一种植物源蛋白,具有很高的营养价值,近些年很多报道证明蛋白多肽具有诸多生物活性,蛋白多肽在生物体内易消化、不易饱和,蛋白多肽具有非常广泛的膳食或药物的应用前景,同时开发新型的矿物质元素补充剂可以大大增加红豆低聚肽的应用范围、提高其附加值。我国杂豆资源廉价并非常丰富,我们可以通过一些生物技术等手段对其进行进一步的深加工,所以本文采用类似方法研究蛋白酶水解红豆生成具有降血压功效的多肽,并对其具有高活性的ACE抑制肽进行初步分离纯化及其微量元素螯合物的制备工艺进行了研究。实验结果表明:1、通过实验选定碱性蛋白酶为最佳反应酶,影响红豆蛋白酶解物的水解度的因素主要有:酶解时间、底物浓度、pH、温度、酶与底物浓度比,得出碱性蛋白酶酶解红豆蛋白的最佳工艺为:底物浓度为6%、pH为9.0、水浴温度为60℃、酶与底物浓度比为6%,在此条件下红豆蛋白的水解度高达16.3%。2、在碱性蛋白酶酶解红豆蛋白实验中,当酶解时间达到90min时,水解度达17.0%,ACE抑制率高达79.5%。在水解度与ACE抑制率之间并没有特定的线性关系,同时以上述实验条件下的酶解液作为原料,利用超滤管进行分离,结果表明截留分子量为10K和3K的超滤管所得超滤液对ACE抑制活性都有提高,其中截留分子量3000的超滤管离心所得的滤液测定其ACE抑制率达82.7%,较未纯化前的酶解液上升了3.2%。3、对红豆低聚肽螯合锌进行单因素优化实验,发现红豆多肽锌螯合物的最佳工艺条件为:锌离子浓度10mL、pH7.0、温度60℃、加入乙醇沉淀剂比例为4:1、螯合60min,算出所消耗的体积为1.57mL,计算得出螯合率为90.58%。我国是农业大国,也是红豆的原产地,我们应该充分利用这优势,但普遍工业生产对蛋白质的利用率都不高,很多蛋白资源通常被当做肥料或者直接排放掉,不仅造成了资源浪费,还造成了环境污染。红豆多肽可以作为一种功能保健食品改善一些特殊人群的生活状况;作为第四代微量元素补充剂,红豆多肽锌螯合物可以添加到动物饲料中,既可以解决微量元素造成的各种生理疾病,又可以给饲料提高营养价值。
摘要第3-5页
ABSTRACT第5-6页
第1章 绪论第10-25页
    1.1 红豆多肽的研究概况第10-18页
        1.1.1 红豆多肽的简介第10-11页
        1.1.2 红豆多肽的生物活性第11-17页
        1.1.3 ACE抑制多肽的研究进展第17-18页
    1.2 多肽螯合锌的研究概况第18-23页
        1.2.1 补锌剂的发展历程第18-20页
        1.2.2 多肽锌螯合物的生物功能活性第20-22页
        1.2.3 多肽螯合锌的制备第22-23页
    1.3 立题背景和研究意义第23-24页
    1.4 主要研究内容第24-25页
第2章 酶解制备红豆低聚肽工艺参数的优化第25-38页
    2.1 前言第25页
    2.2 实验材料第25-26页
        2.2.1 实验原料与试剂第25页
        2.2.2 实验仪器与设备第25-26页
    2.3 实验方法第26-30页
        2.3.1 红豆蛋白的提取第26页
        2.3.2 成分分析第26-28页
        2.3.3 酶解法工艺流程第28页
        2.3.4 不同蛋白酶水解及水解度的测定第28-29页
        2.3.5 酶解红豆蛋白制备ACE抑制肽的单因素实验第29-30页
    2.4 结果与讨论第30-36页
        2.4.1 基本成分的分析第30-31页
        2.4.2 最佳蛋白酶的选择第31-32页
        2.4.3 pH值对水解度的影响第32-33页
        2.4.4 加酶量对水解度的影响第33-34页
        2.4.5 温度对水解度的影响第34-35页
        2.4.6 底物浓度对水解度的影响第35-36页
    2.5 本章小结第36-38页
第3章 红豆低聚多肽ACE抑制活性的研究及初步分离第38-49页
    3.1 前言第38-40页
        3.1.1 ACE简介第38-39页
        3.1.2 ACE抑制剂第39-40页
    3.2 实验材料第40-41页
        3.2.1 实验原料与试剂第40-41页
        3.2.2 实验仪器与设备第41页
    3.3 实验方法第41-44页
        3.3.1 红豆蛋白酶解液中ACE抑制率的测定第41-42页
        3.3.2 不同水解时间的酶解液ACE抑制活性的测定第42页
        3.3.3 超滤第42-44页
    3.4 结果与讨论第44-48页
        3.4.1 ACE酶解实验最佳反应时间的确定第44-46页
        3.4.2 酶解时间对ACE抑制率的影响第46-47页
        3.4.3 超滤分离对抑制率的影响第47-48页
    3.5 本章小结第48-49页
第4章 红豆低聚肽螯合锌的制备研究第49-60页
    4.1 前言第49-51页
        4.1.1 多肽金属元素螯合物第49-50页
        4.1.2 螯合率检测方法原理第50-51页
    4.2 实验材料第51页
        4.2.1 实验原料与试剂第51页
        4.2.2 实验仪器与设备第51页
    4.3 实验方法第51-53页
        4.3.1 试剂配制第51-52页
        4.3.2 红豆低聚肽的制备第52页
        4.3.3 最佳乙醇量沉淀对测定结果的影响第52页
        4.3.4 反应时间对螯合率的影响第52页
        4.3.5 反应温度对螯合率的影响第52-53页
        4.3.6 反应pH对螯合率的影响第53页
        4.3.7 最佳金属离子浓度的选择第53页
    4.4 结果与讨论第53-59页
        4.4.1 最佳螯合时间第53-55页
        4.4.2 最佳乙醇沉淀量对螯合率的影响第55-56页
        4.4.3 金属离子浓度对螯合率的影响第56-57页
        4.4.4 反应温度对螯合率的影响第57-58页
        4.4.5 反应pH对螯合率的影响第58-59页
    4.5 本章小结第59-60页
致谢第60-61页
参考文献第61-68页
攻读学位期间研究成果第68页
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